[发明专利]一种测定丝状真菌生长的新方法

说明书

本发明属于一种测定丝状真菌生长的技术方法，适用于所有液态培养的丝状真菌生长的测定。目前丝状真菌生长的测定最常用的方法是质量法（湿重法及干重法，蛋白质及DNA含量测定法）和生理指标法(呼吸强度、耗氧量、酶活性、生物热等)，这些方法有一定的局限性，大多操作繁杂，耗时长，有些受外界因素影响，误差大。本发明是通过用丝状真菌菌丝体吸附亚甲基蓝的量反推菌丝体的重量从而得到丝状真菌的生长量，即结合微生物对美兰染色液吸附作用，利用分光光度法测定微生物的生长，可以简单、快捷的测定丝状真菌的生长量，以缩短丝状真菌生长测定的时间，提高效率，且测量准确，误差小，适用于与微生物相关的教学、科研和企业生产活动。

技术领域

本发明涉及一种测定丝状真菌生长量的技术方法，适用于青霉、毛霉、根霉、曲霉等各种丝状真菌。

背景技术

丝状真菌俗称霉菌（mould，mold），与人类的生活息息相关，在工农业生产、医疗实践、环境保护和生物学基本理论研究等方面起着重要的作用。快速测定丝状真菌的生长量，对丝状真菌在生产中的利用有着重大的意义。目前丝状真菌生长量的测定方法有质量法（湿重法及干重法，蛋白质及DNA含量测定法）和生理指标法 (呼吸强度、耗氧量、酶活性、生物热等)，这些方法有一定的局限性，大多操作繁杂，耗时长，有些受外界因素影响，误差大。

在现阶段，测定丝状真菌生长量的质量法，是将菌丝体过滤后用滤纸吸去菌丝之间的水，再称重可求出湿重（湿重法），或过滤后洗涤，在105℃干燥至恒重后称重（干重法）。湿重法虽然时间短，但误差较大，干重法精准，但耗时长。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种测定丝状真菌生长的新方法，该方法有效地简化测量丝状真菌生长的步骤，操作简单，且测量准确，误差小，解决了上述现有技术存在的问题。

解决上述技术问题的技术方案是：一种测定丝状真菌生长的新方法，通过用丝状真菌菌丝体吸附亚甲基蓝的量反推菌丝体的重量从而得到丝状真菌的生长量。

上述测定丝状真菌生长的新方法，包括以下步骤：

（1）将培养好的丝状真菌的菌丝体与亚甲基蓝溶液接触一段时间后，离心取上清液；

（2）在亚甲基蓝溶液的最大吸收波长的光波照射下测上清液的吸光度；

（3）绘制菌丝重量和上清液吸光度的关系曲线；

（4）得到菌丝体重量与亚甲基蓝溶液吸光度线性关系标准方程式，

y = ax + b，其中，

y——亚甲基蓝溶液吸光度；

x——菌丝重量，g；

a、b——常数；

（5）在亚甲基蓝溶液的最大吸收波长的光波照射下检测得到待测定丝状真菌的吸光度，通过步骤（4）得到的标准方程式计算出菌丝重量，即可判断该丝状真菌的生长情况。

步骤（1）中，培养好的丝状真菌的菌丝体灭活后再与亚甲基蓝溶液接触。

本发明属于测定丝状真菌生长的技术方法，适用于所有液态培养的丝状真菌生长的测定，例如青霉、毛霉、根霉、曲霉等丝状真菌。本发明将美兰吸附法和分光光度法相结合，即结合微生物对美兰染色液吸附作用，利用分光光度法测定微生物的生长，可以简单、快捷的测定丝状真菌的生长量，以缩短丝状真菌生长测定的时间，提高效率，且测量准确，误差小，适用于与微生物相关的教学、科研和企业生产活动。

具体实施方式

实施例1：一种测定（黑曲霉）丝状真菌生长的新方法，包括以下步骤：

1. 在无菌条件下按1.0%接种量将浓度为10⁶个/mL黑曲霉（H922）孢子悬液接种到马铃薯葡萄糖液体培养基中，在28℃、160r／min的旋转式摇床上培养36h。