[发明专利]一种构建甲基化测序文库的方法及相应的接头序列和试剂盒在审
| 申请号： | 201810563270.1 | 申请日： | 2018-06-04 |
| 公开（公告）号： | CN108753923A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 曹亮;束文圣;吴胜标;王璋;郝祎琪 | 申请（专利权）人： | 广州微芯生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6869;C12N15/11;C12N15/10;C40B50/06 |
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| 地址： | 510300 广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 接头序列 测序文库 甲基化 构建 试剂盒 退火 胞嘧啶碱基 甲基化修饰 重亚硫酸盐 化学修饰 环状结构 茎环结构 试剂成本 长碳链 测序 单链 二聚 建库 双链 应用 主流 转化 | ||
1.一种用于构建甲基化测序文库的接头序列，其特征在于，所述接头序列的5’端用磷酸修饰，且靠近5’端的GATCGGAAGAGC与靠近3’端的GCTCTTCCGATC形成双链茎结构，其余碱基形成环状结构；3’端最后一个碱基为T，并以硫代修饰；同时，所述接头序列中的胞嘧啶碱基经过甲基化修饰。
2.根据权利要求1所述用于构建甲基化测序文库的接头序列，其特征在于，所述环状结构至少包含2个碱基，所述环状结构的中间还以C3～C21修饰。
3.根据权利要求2所述的用于构建甲基化测序文库的接头序列，其特征在于，所述环状结构上的碱基为39个。
4.根据权利要求2所述的用于构建甲基化测序文库的接头序列，其特征在于，所述环状结构的中间以1～3个C18修饰。
5.根据权利要求4所述的用于构建甲基化测序文库的接头序列，其特征在于，所述环状结构的中间以1个C18修饰。
6.根据权利要求5所述的用于构建甲基化测序文库的接头序列，其特征在于，所述环状结构由19个碱基+C18+20个碱基构成。
7.一种构建甲基化测序文库的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、提取样品的基因组DNA，进行DNA分子的打断；
S2、将打断的DNA分子进行末端修复和加A；
S3、在经过末端修复和加A的DNA分子两端加入权利要求1～4中任意一条权利要求所述的接头序列；
S4、对加入接头序列的DNA分子进行重亚硫酸盐转化，然后进行扩增，得到甲基化测序文库。
8.根据权利要求7所述的构建甲基化测序文库的方法，其特征在于，所述接头序列的浓度为5～20μM。
9.根据权利要求8所述的构建甲基化测序文库的方法，其特征在于，所述接头序列的浓度为15μM。
10.一种用于构建甲基化测序文库的接头试剂盒，其特征在于，包含权利要求1～6中任意一条权利要求所述的接头序列。
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