[发明专利]一种利用无底钵伤根接种法进行茄子黄萎病抗性鉴定方法

说明书

本发明公开了一种利用无底钵伤根接种法进行茄子黄萎病苗期抗性鉴定的方法，包括以下步骤：(1)选取饱满的种子，在55℃水温下浸泡15min，边浸泡边搅拌，清水浸泡后，变温催芽，均匀播在下方具有开孔的营养钵内；(2)将茄子黄萎病菌株进行活化，配制孢子悬浮液；(3)待茄苗长至3‑4片真叶，将营养钵下方开孔处长出的茄苗须根剪掉后置于盛放装置内浸泡接种；(4)接种后，待出现症状后进行发病调查，并计算出病情指数。本发明利用无底钵伤根接种法进行抗性鉴定的方法，苗期抗病性鉴定中，无底钵伤根接种法更能体现出茄子抗黄萎病真实抗性，且发病稳定、均匀，发病速度较快，效率高；且病情指数分级标准科学，易掌握。

技术领域

本发明涉及植物抗性鉴定技术领域，特别涉及一种利用无底钵伤根接种法进行茄子黄萎病抗性鉴定方法。

背景技术

茄子黄萎病是大丽轮枝菌侵染危害的一种世界性的土传维管束病害。该病原菌寄主范围十分广泛，除侵染茄子外，还可侵染危害棉花、番茄、向日葵、马铃薯、草莓等600多种作物。1914年美国首次发现大丽轮枝菌引起的棉花黄萎病，1935年我国因引进美国棉花品种而传入黄萎病病菌。20世纪50年代初茄子黄萎病仅在我国东北地区局部发生，随着茄果类蔬菜种植面积的扩大而迅速蔓延，发病范围日益南扩，目前我国茄子主要栽培地区均发生该病害。茄子黄萎病发病率高，一般年份发病率为40％～50％，严重年份达70％以上，甚至毁种失收，对茄子品质和产量都造成严重的影响，已成为制约茄子产业发展的重要病害。

黄萎病为典型的土传维管束病害，微菌核是大丽轮枝菌主要存活结构和初侵染源，由于其抗逆性强，在土壤中存活时间长，化学防治不理想；轮作倒茬虽然有效，但给蔬菜生产茬口安排带来实际困难；嫁接技术可有效减轻茄子黄萎病发生，但带来嫁接的技术和成本问题，很难在生产实践中应用推广。选育和利用抗病品种是防治茄子黄萎病最直接、安全、高效的措施之一，而筛选抗病种质资源是抗病育种的重要基础工作。自然病圃法是抗性鉴定中最传统、应用最普遍的方法，其鉴定结论至今仍是新品种审定时的主要依据。但其鉴定周期长，受季节影响，鉴定材料数量受限。此外，病圃中病原菌数量不确定、分布不均及气候环境条件变化等一系列因素均影响鉴定结果的准确性。

苗期人工接种法，不受季节影响，能更好的控制选择压，可大量、重复筛选材料。目前，普遍采用蘸根接种法，其优点是发病均匀、发病快。但采用蘸根接种时，各品种间发病均较重，不能准确、有效地呈现出品种间对黄萎病的抗性差异，与自然病圃成株期发病水平差异较大，不能反应出品种的真实抗性。

因此，建立一套快速、稳定、准确、有效，最大限度体现出茄子品种真实抗病性的苗期人工抗病性鉴定方法及鉴定装置是一个亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明提供一种利用无底钵伤根接种法进行茄子黄萎病抗性鉴定方法，其解决了上述现有的苗期接种技术缺点，提供一种提高茄子黄萎病种质材料筛选和研究效率的抗病性评价方法。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种利用无底钵伤根接种法进行茄子黄萎病苗期抗性鉴定的方法，包括以下步骤：

(1)选取饱满的种子，在55℃水温下浸泡15min，边浸泡边搅拌，然后清水浸泡48h后，将种子从清水中捞出，沥干水分，用纱布包好后进行变温处理催芽，待种子露白后，均匀播在下方具有开孔的营养钵内；

(2)将茄子黄萎病菌株在PDA培养基平板上进行活化，于25℃-26℃培养4-7d，挑取2-3mm菌块2-3块转入150mL PD液体培养基中，于25℃-26℃，130rpm/min摇床培养4-7d后，四层灭菌纱布过滤，通过灭菌水稀释，配制成一定浓度的孢子悬浮液；

(3)待茄苗长至3-4片真叶，用消毒过的剪刀将营养钵下方开孔处长出的茄苗须根剪掉后，将营养钵浸泡在装有孢子悬浮液的盛放装置内浸泡接种，浸泡时间10-30min；