[发明专利]一种以叶片诱导不定芽的龙珠果组织培养方法有效
| 申请号： | 201810565126.1 | 申请日： | 2018-06-04 |
| 公开（公告）号： | CN108782243B | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 段俊;刘艳艳;何春梅 | 申请（专利权）人： | 中国科学院华南植物园 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 44001 广州科粤专利商标代理有限公司 | 代理人： | 刘明星;朱双<国际申请>=<国际公布>= |
| 地址： | 510650 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 龙珠 外植体 叶片 组织培养 不定芽 诱导 消毒 不定芽诱导培养基 材料利用率 工厂化生产 繁殖周期 快速繁殖 培养周期 生根壮苗 育苗技术 植株 污染率 出苗 快繁 移栽 取材 伤害 成功 | ||
1.一种以叶片诱导不定芽的龙珠果组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.外植体的准备：取龙珠果叶片，经消毒后，将叶片切块作为外植体；
b.诱导不定芽：将外植体以叶片近轴面朝上的方式接入不定芽诱导培养基培养，诱导出不定芽；
所述的不定芽诱导培养基：每升含有TDZ0.005～0.02mg、琼脂6.0～7.0g、蔗糖20～30g和余量的MS培养基，pH5.7～5.8；
c.生根壮苗培养：将不定芽转接到生根壮苗培养基培养，获得生根苗；
所述的生根壮苗培养基：每升含有IBA0.05～0.2mg、琼脂6.0～7.0g、蔗糖20～30g和余量的1/2MS培养基，pH5.7～5.8；
d.炼苗及移栽：将生根苗炼苗，移栽，进行培养管理，得到龙珠果植株；
所述的步骤d的炼苗及移栽，是当生根苗长至8～10cm高时，将培养瓶打开瓶盖后转移到自然光下炼苗7～10d；然后取出生根苗并用自来水将根部的培养基冲洗干净，种植于将泥炭土：蛭石：珍珠岩以体积比2:1:1混匀得到的基质中，适时浇水。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤a的消毒是将龙珠果叶片用无菌水清洗2～3次，然后用体积分数75％乙醇水溶液将叶片正反面擦拭后，再用无菌水清洗2～3次，然后用加有终浓度为质量分数0.02％的Tween-20的质量分数0.1％的HgCl2溶液浸泡3～5min，最后用无菌水冲洗4～5次。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤b的将外植体接入不定芽诱导培养基培养，是将外植体以叶片近轴面朝上的方式接入不定芽诱导培养基培养。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤b、c中的培养条件为温度25±2℃、光照强度1500～2000lx、光照时间12h/d。
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