[发明专利]一种龙珠果组织培养方法

说明书

本发明公开了一种龙珠果组织培养方法。本发明以龙珠果叶片作为外植体，经消毒后得到污染率极低、伤害较小的外植体，消毒成功的外植体在不同配方的诱导培养基中诱导得到体胚、体胚和不定芽等不同产物，将体胚转接到体胚萌发培养基中继续培养得到萌发的体胚，经植株再生培养、移栽等过程得到长势良好的龙珠果植株。本发明具有取材方便、材料利用率高、数量多、操作简单、适用于工厂化生产等优点，建立了以龙珠果叶片为外植体的组织培养快繁体系，为开展龙珠果快速繁殖提供育苗技术。

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种龙珠果组织培养方法。

背景技术

龙珠果(Passiflorafoetida L.)，又名香花果、天仙果、野仙桃等，为西番莲科西番莲属草质藤本植物。原产于西印度群岛，在我国主要分布于广东、海南、福建和台湾等地，生长于荒山草坡、灌丛或近海边沙滩(王东等，2014)。

龙珠果植株高数米，整株尤其是损伤的叶片常散发出辛辣的味道；茎具条纹且有平展柔毛；叶膜质，表面有柔毛，宽卵形或长圆状卵形，基部心形且有3～5个浅裂，边缘不规则，叶脉羽状；叶柄具平展柔毛；托叶半抱茎，深裂；聚伞花序，花白色或淡紫色，具白斑；苞片3枚；萼片5枚；花瓣5枚；浆果卵圆球形，无毛；种子多数，椭圆形，草黄色；花期7～8月，果期翌年4～5月(中国植物志，1999)。龙珠果花朵秀丽，颜色多变，具有一定的观赏价值；果实外形美观，香甜可食，具有一定的经济价值；全株可入药，具有一定的药用价值。

龙珠果中主要含有黄酮类化合物，其主要成分有牡荆素、异牡荆素、荭草素、异荭草素等(中华本草，1999)。龙珠果具有清热解毒、清肺止咳之功效，临床多用于治疗肺热咳嗽、小便混浊、痈疮肿毒、外伤性眼角膜炎、淋巴结炎等症(姬生国等，2012；中国植物志，1999)。国外研究表明，龙珠果提取物在治疗酒精、尼古丁、吗啡及大麻酚的药物成瘾性方面疗效较好(Sasikala等，2011；Sathish等，2011)。果实可用作催吐剂、用果实煎煮可用于治疗哮喘；叶片外敷可治疗创伤，干燥的叶片泡茶有助于解决睡眠问题；根可用于调经并且对治疗过度兴奋和暴躁有作用(Deshaprabhu，1966；Krishnaveni和Thaakur，2008)。

组织培养具有快速、大量、遗传稳定性好等优点。利用组织培养技术进行植物快速繁殖有利于解决种子来源稀少或种子萌发困难植物的繁殖问题、挽救珍稀濒危物种、解决药用植物野生资源短缺等问题。目前，国内学者对龙珠果的研究主要集中在成分测定、药理作用等方面，组织培养相关的研究报道较少。国外虽有龙珠果组织培养相关的研究，但所用的外植体多见于龙珠果种子、茎段等部位，未见以龙珠果叶片为外植体诱导体胚和不定芽的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作性强、繁殖效率高、增值系数大、能用于工厂化生产的龙珠果组织培养方法，通过该方法可以对龙珠果进行大量、快速繁殖。

本发明包括两种龙珠果组织培养方法，分别是以叶片诱导体胚、诱导体胚和不定芽的龙珠果组织培养方法。

本发明的以叶片诱导体胚的龙珠果组织培养方法，包括以下步骤：

a.外植体的准备：取龙珠果叶片，经消毒后，将叶片切块作为外植体；

b.诱导体胚：将外植体接入体胚诱导培养基培养，诱导出体胚；

所述的体胚诱导培养基：每升含有2,4-D 0.5～3.0mg、TDZ 0.05～0.15mg、琼脂6.0～7.0g、蔗糖20～30g和余量的MS培养基，pH 5.7～5.8；

c.体胚萌发：将体胚转接到体胚萌发培养基培养，得到萌发的体胚；

所述的体胚萌发培养基：每升含有6-BA 1.5～2.5mg、NAA0.15～0.25mg、GA₃0.5～1.5mg、琼脂6.0～7.0g、蔗糖20～30g和余量的MS培养基，pH 5.7～5.8；