[发明专利]一种利用蓝藻合成根皮素的方法

权利要求书

1.一种利用蓝藻合成根皮素的方法，其特征在于，将4香豆酸-辅酶A连接酶基因（4CL）以及查尔酮合成酶基因（CHS），导入蓝藻细胞得到重组蓝藻细胞，利用重组蓝藻细胞催化对羟基苯丙酸得到根皮素。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蓝藻为聚球藻Synechococcuselongatus PCC7942。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤： 构建整合载体NSI：选取所述Synechococcus elongatus PCC7942基因组上的基因序列段，且该段基因序列的改变不会影响Synechococcus elongatus PCC7942整个基因组的功能，以此来构建并获得整合载体NSI; 重组载体：根据Synechococcus elongatus PCC7942细胞密码子偏好性优化基因4CL和CHS的密码子，然后将这两个基因插入到载体NSI上，得到带有氯霉素抗性基因的重组载体NSI-CHS-4CL； 同源重组：将重组载体NSI-CHS-4CL转化入Synechococcus elongatusPCC7942细胞内，通过同源重组作用，将CHS和4CL两个基因整合到Synechococcuselongatus PCC7942基因组上的NSI基因位点，并以诱导型启动子Trc来控制基因的表达；筛选确认：以氯霉素来筛选转化NSI-CHS-4CL载体后的Synechococcus elongatus PCC7942单克隆细胞，然后提取该细胞基因组，通过PCR分子鉴定试验确定最终携带有4CL基因和CHS基因的Synechococcus elongatus PCC7942； 催化合成：将经过筛选的Synechococcuselongatus PCC7942进行培养，添加底物对羟基苯丙酸，并添加IPTG诱导CHS和4CL两个基因表达，得到根皮素。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述4CL根据向日葵中基因的氨基酸序列进行合成。

5.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述CHS根据灯盏花中基因的氨基酸序列进行合成。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述氯霉素筛选过程包括： S1：将同源重组后的细胞置于氯霉素固体培养基，初步筛选得到存活的Synechococcus elongatusPCC7942； S2：将所述Synechococcus elongatus PCC7942转接带有氯霉素抗性的液体培养基，待其成长后，提取其基因组，通过PCR分子鉴定试验确定最终携带有4CL基因和CHS基因的Synechococcus elongatus PCC7942。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，还包括：在催化合成根皮素之后，对收集完成的根皮素进行分离提纯，并利用高效液相色谱仪进行检测。