[发明专利]一种人源化CD-19嵌合抗原受体T淋巴细胞载体及其应用

说明书

本发明公开了一种人源化CD‑19嵌合抗原受体T淋巴细胞载体，其特征在于：包含编码CD19单抗、核小体组蛋白单抗和FNEDB单抗的单链可变区基因的质粒载体。所述载体为慢病毒载体。所述人源化CD‑19嵌合抗原受体T淋巴细胞载体在制备CART细胞中的用途。也用于转导T淋巴细胞、自然杀伤细胞、单核细胞。其应用在于治疗肿瘤。优选治疗恶性淋巴瘤药物中的复发、难治和骨髓移植配型不成功的血液肿瘤和淋巴瘤。有益效果在于本发明构建的载体可以增强靶向CD19抗原转基因T细胞特异性，克服肿瘤微环境抑制免疫细胞功能，控制临床治疗中细胞因子风暴。

技术领域

本发明涉及嵌合抗原受体领域。具体来说，本发明涉及人源化CD-19嵌合抗原受体T淋巴细胞载体及其应用。

背景技术

血液系统恶性肿瘤和淋巴瘤在癌症中较为常见，在中国人中发病率分别为2.76人/10万和6.91人/10万，粗略估计每年发病人数约为3.7万和9.3万。大多数患者用传统的化疗、放疗均无法治愈，骨髓/外周血干细胞移植被认为是治愈血液肿瘤的有效途径，对髓系血液肿瘤疗效较好，而B细胞急性淋巴细胞白血病移植后长期缓解率不到10％，且骨髓配型困难，费用高，移植后需常年服用免疫抑制剂。

最近几年，CAR-T细胞在血液肿瘤和淋巴瘤治疗中获得了突破性进展，为治愈癌症带来了希望。2011年CAR-T首次被用于治疗一例难治性急性淋巴细胞白血病患者获得成功，残留病灶消失，随访至今仍未复发。随后短短几年内，多家研究机构与生物医药公司在该领域进行了大量研究，证实该疗法在血液病治疗中效果优异，某些血液病治疗的完全缓解率可达到90％以上。国内多家研究机构和医院、生物公司也开始开展CAR-T治疗技术，并取得了良好的疗效，但较国外报道尚存在一定差距。

在目前报道的CAR-T治疗技术中CTL019在血液肿瘤治疗临床试验中取得了超过90％的完全缓解率，被美国FDA正式批准应用于临床治疗，这是人类历史上的一个里程碑事件。CD19在多种B细胞恶性血液肿瘤细胞、B细胞淋巴瘤及部分髓系白血病细胞表面表达，包括非何杰金病、急性淋巴细胞性白血病和慢性淋巴细胞性白血病等，除B细胞外，CD19一般不在正常组织表达，因为成为免疫治疗的良好靶点。基于这一认识，利用识别CD19的单链抗体经基因工程技术与人类T细胞受体胞内区激活信号CD3ζ链接，同时链接上系统刺激信号分子4-1BB、CD28等，构建了嵌合抗原受体，通过细胞融合或电转等方式将CAR转移到患者的T细胞上构建CAR-T细胞，从而突破MHC限制性，经体外扩增后，回输到患者体内，在B细胞/肿瘤细胞表面的CD19抗原后，在体内增殖、活化，靶向性杀伤肿瘤细胞；协同刺激因子的存在增强了T细胞增殖能力和增加了细胞因子的释放，增强了杀伤肿瘤细胞的效应。因此，CAR-T技术被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一。

随着对肿瘤认识的加深和基因工程技术的发展，CAR-T技术发展迅速。CAR-T为识别特异性肿瘤相关抗原的单链抗体与免疫细胞激活结构构成的人工重组受体，经过三代的研发，现已发展到第四代技术。第一代CAR-T技术仅含单链可变区域与T细胞激活信号CD3ζ；第二代和第三代增加1-2个协同刺激信号分子4-1BB、OX-40、CD28等；第四代则增加了转基因免疫调节剂来重塑肿瘤微环境。目前三代技术已开始运用于临床，而四代技术仍在研发阶段。