[发明专利]一种以碱性氨基酸为锚定端的锚定多肽及其应用

说明书

本发明公开了一种锚定多肽RRFPDD，采用碱性氨基酸代替传统的半胱氨酸进行锚定，达到快速负载的目的；使用酸性的天冬氨酸，以提供大量的负电荷，去增强锚定多肽对金纳米粒子的保护性能；通过调控疏水氨基酸的种类，促进该多肽的自组装。目标探针连接在锚定多肽的保护端与金纳米粒子在pH＝7.4磷酸盐缓冲液中，37℃培养100秒，即可得到生物检测试剂，生物检测试剂通过标准曲线法可以检测目标检测物的浓度，特别是利用序列为FYSHSFHENWPS的多肽作为目标探针制备的生物检测试剂检测心肌肌钙蛋白时，线性范围为0.05‑500ng/mL，检出限可达0.45ng/mL。

技术领域

本发明涉及一种以碱性氨基酸为锚定端的锚定多肽以及一种在金纳米粒子上快速、高效以及可控地负载多肽或DNA的方法。

背景技术

生物分子(如多肽、DNA等)负载于金纳米粒子表面的技术极大程度地推动了纳米生物技术、生物传感器及医学诊断等领域的迅速发展。为此，大量的应用应运而生，比如生物传感、疾病诊断及药物分离等。

常见的负载方法是利用五肽CALNN作为锚定多肽，通过在尾端连接多肽或者DNA，并且利用其半胱氨酸中的巯基与纳米粒子键合，实现修饰。不仅如此，CALNN中的天冬酰胺带有大量的负电荷，能在负载过程中维持金纳米粒子的稳定性。因此，该负载方法由于其稳定、作用力强等优势，广泛应用在各种领域，如离子检测、细菌检测以及药物输送。但这种传统的负载手段对锚定多肽的需求大，培养时间长(24小时)，负载效率低，并且占据了金纳米粒子的表面位点，不利于后期的功能化。

发明内容

为了改善传统方法中半胱氨酸负载效率低及耗时的问题，本发明选用碱性氨基酸组成多肽的锚定端，以取代传统的五肽CALNN，在该锚定多肽的介导下，实现了快速、高效以及可控地在金纳米粒子上负载多肽或者DNA，并增强了金纳米粒子的稳定性。

本发明提供的技术方案具体如下：

一种锚定多肽，锚定端为碱性氨基酸，中段为疏水的中心氨基酸，保护端为酸性氨基酸。进一步地：锚定端含有2个碱性氨基酸，保护端含有2个酸性氨基酸；所述的碱性氨基酸为精氨酸，所述的酸性氨基酸为天冬氨酸。

优选地：锚定多肽的序列为RRFPDD。

一种利用上述锚定多肽制备生物检测试剂的方法，包括以下步骤：

(1)将目标探针连接在上述锚定多肽的保护端，得到待锚定探针；

(2)将待锚定探针加入NaH₂PO₄-Na₂HPO₄缓冲溶液中，调节pH至7.4，得到待锚定探针溶液；

(3)制备金纳米粒子分散液，然后向其加入NaH₂PO₄-Na₂HPO₄缓冲溶液，调节pH至7.4，得到AuNPs-磷酸盐分散液；

(4)将待锚定探针溶液加入AuNPs-磷酸盐分散液中，37℃培养，即得到生物检测试剂。

所述的目标探针为多肽或DNA，调节pH所用的试剂为碳酸钾溶液，37℃培养的时间为100秒。

一种生物检测试剂，由上述方法制备得到。

上述生物检测试剂在非治疗目的生物检测领域的应用。

一种利用上述生物检测试剂检测心肌肌钙蛋白的方法，包括以下步骤：

向上述生物检测试剂中加入不同浓度的目标检测物，通过紫外分光光度计捕获聚集信号，制备标准曲线；加入未知浓度的目标检测物，通过紫外分光光度计捕获聚集信号，根据信号强度和标准曲线公式计算目标检测物的浓度。