[发明专利]一种外周血与月经血鉴别用试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种外周血与月经血鉴别用试剂盒及其应用，所述试剂盒包括四种环状RNA的上下游PCR扩增引物，所述环状RNA为hsa_circ_0000212、novel_circ_0013653、novel_circ_0013655和novel_circ_0013656。本试剂盒中所涉及的四种环状RNA在月经血中含量丰富且表达水平具有组织特异性，是鉴别外周血与月经血的更为理想的分子标记。通过对外周血与月经血进行鉴别，能够简单、高效地区分外周血与月经血，为犯罪案件的侦破提供技术支持。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及一种外周血与月经血鉴别用试剂盒及其应用。

背景技术

对犯罪现场遗留体液的分析检验是法医物证鉴定的重要环节。判断体液的组织来源可以为确定案件性质、进行现场重现提供证据。血痕是犯罪现场最常见的一种体液痕迹，识别犯罪现场的血痕是外周血还是月经血，对案件重塑至关重要。外周血与月经血的外观很难区分，传统方法通常利用月经血中特有细胞的形态特征来鉴别，操作繁琐，无法满足法医检案准确、快速的要求。近十几年来发展起来的以分子遗传学为基础的RNA(mRNA，miRNA等)和DNA甲基化检测方法被认为可能是新型的理想的用于识别不同体液的方法，有望取代传统的体液识别技术。然而既往研究显示：目前筛选出的用于组织/体液识别的差异化甲基化位点还太少，同时甲基化水平易受环境、疾病、年龄等的影响；mRNA极易被无处不在的RNA酶降解，暴露在强日光或紫外光照射下、潮湿环境等因素都会影响mRNA的稳定性；miRNA片段短小，对检测技术设计要求较高，且目前报道的已筛选出的用于月经血鉴别的miRNA位点可重复性不佳。因此，需要探索新的遗传标记进行法医相关体液识别。

发明内容

针对现有检测方法存在易受外界干扰、不稳定、对检测技术设计要求高、可重复性不佳的技术问题，本发明提供了一种外周血与月经血鉴别用试剂盒。

以及，本发明还提供了一种外周血与月经血的实时荧光定量鉴别检测方法。

以及，本发明还提供了上述实时荧光定量鉴别检测方法用于法医鉴别待测血样来自外周血或月经血的应用。

以及，本发明还提供了一种外周血与月经血的琼脂糖凝胶电泳鉴别检测方法。

以及，本发明还提供了一种上述琼脂糖凝胶电泳鉴别检测方法用于法医鉴别待测血样来自外周血或月经血的应用。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种外周血与月经血鉴别用试剂盒，所述试剂盒包括四种环状RNA的上下游PCR扩增引物，所述环状RNA为hsa_circ_0000212、novel_circ_0013653、novel_circ_0013655和novel_circ_0013656；其中，

所述hsa_circ_0000212的上下游PCR扩增引物为：

上游引物：5’-GAAAGGCACCGCAGAATATGAAC-3’，

下游引物：5’-AGCTGACAAAGTGCTCTCCATG-3’；

所述novel_circ_0013653的上下游PCR扩增引物为：

上游引物：5’-AGCTCCTTCCAGCACGAGAT-3’，

下游引物：5’-GTCCGGAATTGGGTGAAGGT-3’；

所述novel_circ_0013655的上下游PCR扩增引物为：

上游引物：5’-CAGGCAGGAGCTGAATACCAT-3’，

下游引物：5’-GGTCTTTGTACTTCTGCCCATC-3’；