[发明专利]一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株及其培养方法和应用

说明书

本发明公开了一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株，该菌株为克里布所类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)，单个菌体直径为0.5～0.7×2～3微米；无荚膜，周生鞭毛。革兰氏阳性，芽孢0.7～0.9×1.1～1.4微米，椭圆型。菌落表面粗糙不透明，白色或微黄色，在马铃薯葡萄糖液体培养基中摇菌培养72h后曾微黄色；于2018年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC NO:M 2018236。本发明的菌株制作简单且成本低，无毒、无害、及无环境污染，有利于安全有效的抑制大白菜菌核病菌菌丝生长，同时有利于大白菜的绿色栽培，保护农田生态系统。

技术领域

本发明涉及菌株领域，具体涉及一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株及其培养方法和应用。

背景技术

类芽孢杆菌属(Paenibacillus)细菌已被从各种环境中分离出来，许多物种与人类、动物、植物和环境有关。其中大部分类芽孢杆菌属细菌是在土壤中发现的，通常为植物根系促生菌，这些类芽孢杆菌属细菌具有促进植物生长的作用，可在农业生产上加以利用。有些类芽孢杆菌属细菌会产生抗菌化合物，这些化合物在医药或杀虫剂中都很有用，还有些类芽孢杆菌属细菌会用于生产有生物修复作用的酶或生产珍贵的化学品。多粘类芽孢杆菌可产生多肽抗生素、拮抗蛋白、酶、植物激素、絮凝剂等多种生物活性物质，兼有生物农药和生物菌肥的作用，已广泛应用于农业、工矿业及废水处理等领域。美国环境保护署(EPA)已将其列为可在商业上应用的微生物种类之一，我国农业部也将其列为免做安全鉴定的一级菌种。传统农业中化学农药的过量使用不仅会增加农药残留量，同时导致了许多作物病虫害的抗药性，并对土壤、水体及生态环境造成污染。随着社会的进步，人们生活水平的提高，对食品安全的意识不断加强，在这种情况下应用高效、广谱、安全、无毒的有益微生物进行植物疫病的防治越来越受到人们的重视。类芽孢杆菌属细菌产生的多肽类抗菌物质对植物病原真菌具有很好的拮抗活性，且性质比较稳定，可用于多种植物病害的生物防治。因此，类芽孢杆菌属细菌是一类极具开发前景和应用价值的生防细菌。

发明内容

本发明的目的在于提供一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株及其培养方法和应用。

为实现上述目的，发明人从大白菜上分离得到一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株，通过鉴定证明其为克里布所类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)，于2018年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心, 保藏号为CCTCC NO: M 2018236 ；地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。本发明的菌株DG1为需氧菌，单个菌体直径为0.5～0.7×2～3微米；无荚膜，周生鞭毛。革兰氏阳性，芽孢0.7～0.9×1.1～1.4微米，椭圆型。菌落表面粗糙不透明，白色或微黄色，在马铃薯葡萄糖液体培养基中摇菌培养72h后曾微黄色。

所述菌株的16SrDNA序列GenBank序列号为SEQ MH351014。

本发明还提供了上述一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株的培养方法，包括如下步骤：将该菌株接种于含有5ml PS(马铃薯蔗糖)培养基因的 180mm╳18mm试管中，于28℃、180rpm摇床恒温培养2d,然后将发酵液于4℃、 10000╳g条件下离心10min收集上清液，并采用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即可获得该菌株的发酵液。

上述的一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株的应用，其特征在于，可用于植物病害的防治。所述菌株的发酵液可抑制大白菜菌核病菌菌丝生长。

本发明的菌株制作简单且成本低，无毒、无害、及无环境污染，有利于安全有效的抑制大白菜菌核病菌菌丝生长，同时有利于大白菜的绿色栽培，保护农田生态系统。

附图说明

图1为菌株DG1基于16S rRNA基因序列比对结果以Thermobacillusxylanilyticus(AJ005795.1)为外枝构建的Neighbor-Joining系统发育树。