[发明专利]一种培养苹果三倍体种质的方法

说明书

本发明公开了一种培养苹果三倍体种质的方法：选取‘四倍体嘎拉’ב寒富’成熟果实，去掉果肉，取出种子，对种子进行消毒处理后剥去种皮，接种在培养基上培养，杂种胚离体培养30d，幼苗进行倍性鉴定，鉴定为三倍体的株系去掉根系，转移到继代培养基中，一个月左右继代一次，当每个株系增殖达到10株以上，接种到生根培养基中进行生根，生根后移栽到田间营养钵中，进行常规田间管理，即得苹果三倍体种质；本发明的培养方法可定向培养多倍体，操作简单，多倍体杂交种成苗率达90％以上，三倍体资源率占成苗的30％，解决了苹果多倍体杂交种田间常规播种不能出苗或出苗率低的问题，为创制综合性状优良的苹果多倍体新品种提供有效技术支持。

技术领域

本发明涉及农业育种领域，涉及一种培养果树三倍体种质的方法，具体涉及一种培养苹果三倍体种质的方法。

背景技术

苹果属于蔷薇科(Rosaceae)苹果属(Malus)，由于其生态适应性强，果品营养价值高，耐贮性好，供应周期长，而在世界各地得到广泛栽培。目前，世界上栽培的苹果品种以二倍体品种为主，但也有表现性状优良的三倍体品种。苹果多倍体一般具有生长旺盛、果实大且少籽或无籽、产量高、适应性和抗逆性强等特点，且能够利用无性繁殖的方式固定其优良性状，使之保持稳定而不分离，在生产上长期利用。鉴于上述优点，果树的多倍体育种工作正越来越受到重视，已经成为果树育种工作的重要组成部分。

当某树种中存在不同倍性材料时，利用不同倍性材料杂交是获得新的多倍体最为简捷而有效的途径。前人已利用化学诱变的方法获得了苹果四倍体资源，得用四倍体与二倍体杂交获得三倍体新品种最佳方法。然而苹果四倍体花粉发芽率很低，用其作父本授粉率太低，作母还可以获得一定量的杂交种。

近年来苹果多倍体育种工作进展缓慢，主要障碍就是杂交种出苗率过低造成的。这一问题严重阻碍了苹果多倍体育种进程。因此迫切需要解决多倍体杂交种出苗及成苗的难题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种培养苹果三倍体种质的方法，以解决目前杂交种出苗率过低的问题，以苹果杂种子离体试管培养，增殖及倍性鉴定相结合，定向培养多倍体的方法，为创制综合性状优良的苹果三倍体新品种奠定技术基础。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种培养苹果三倍体种质的方法，包括以下步骤：

(1)选取‘四倍体嘎拉’ב寒富’的成熟果实，去掉果肉，取出种子，对种子进行消毒处理后在无菌条件下剥去种皮；

(2)将剥去种皮的杂种胚接种在装有培养基的容器内进行培养；

(3)杂种胚离体培养30d，可发育成10cm高的全苗，在无菌条件下采取叶片及根尖，进行倍性鉴定并将鉴定为三倍体的植株去掉根系，剪接成1.5cm的茎段转移到继代培养基中，一个月左右继代一次；

(4)当每个株系增殖达到10株以上时，接种到生根培养基中进行生根，当植株根系长到2-3cm时，打开瓶口练苗3-7d，移栽到田间营养钵中，进行常规田间管理，即得苹果三倍体种质。

本发明的培养方法可定向培养多倍体，操作简单，多倍体杂交种成苗率达90％以上，三倍体资源率占成苗的30％，解决了苹果多倍体杂交种田间常规播种不能出苗或出苗率低的问题，为创制综合性状优良的苹果多倍体新品种提供有效技术支持。

进一步，步骤(1)中的消毒处理的操作为：将种子放入100ml三角瓶中，依次用70％的乙醇浸泡30s，0.1％的升汞浸泡5min，无菌水冲洗3次。

采用上述进一步的有益效果是：不损伤植株组织，且能有效的杀灭微生物，使组织可以很快恢复生长，进行正常繁殖，本发明选用特定的试剂进行消毒，既有良好的消毒作用，又不会损伤植物的组织细胞，还容易被无菌水洗掉，不影响消毒后组织细胞的分化。