[发明专利]大黄甘草汤的质量控制方法

权利要求书

1.一种大黄甘草汤的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)样品溶液的制备

先取甘草药材，加8至16倍量的水回流提取，然后加入大黄药材，并加入药材总重量8~16倍的水，回流提取，过滤得到大黄甘草水提液，离心，吸取上清液，过0.22 μm滤膜，得样品溶液；

(2)对照品溶液的制备

精密称定大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、番泻苷A、番泻苷B、甘草酸、甘草次酸、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查耳酮A和光甘草定对照品各5 mg左右，用90%甲醇溶解为浓度分别为大黄酸108.6 μg·mL^-1、大黄素106.0 μg·mL^-1、芦荟大黄素220.0 μg·mL^-1、大黄酚90.0 μg·mL^-1、大黄素甲醚130.0 μg·mL^-1、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷1347.0 μg·mL^-1、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷408.3 μg·mL^-1、番泻苷A 126.0 μg·mL^-1、番泻苷B 245.0 μg·mL^-1、甘草酸1353.0 μg·mL^-1、甘草次酸721.4 μg·mL^-1、甘草苷505.7 μg·mL^-1、异甘草苷3320.0μg·mL^-1、甘草素3233.0 μg·mL^-1、异甘草素3553.0 μg·mL^-1、甘草查耳酮2127.0 μg·mL^-1、光甘草定2647.0 μg·mL^-1的对照品储备液；

然后定量吸取各对照品储备液获得混合对照品储备液，其中大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、番泻苷A、番泻苷B、甘草酸、甘草次酸、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查耳酮A、光甘草定的含量分别为15.404 μg·mL^-1、15.035 μg·mL^-1、15.603 μg·mL^-1、12.766 μg·mL^-1、18.440 μg·mL^-1、19.106 μg·mL^-1、14.479 μg·mL^-1、17.872 μg·mL^-1、17.376 μg·mL^-1、19.191 μg·mL^-1、15.349 μg·mL^-1、14.346 μg·mL^-1、23.546 μg·mL^-1、22.929 μg·mL^-1、25.199 μg·mL^-1、15.085 μg·mL^-1、23.005 μg·mL^-1；

(3) 定量分析

将步骤(1)制备得到的样品溶液和步骤(2)制备得到的混合对照品储备液，分别进行超高效液相色谱检测，分别获得样品和对照品的UHPLC-TQ-MS/MS色谱图，然后进行定性定量分析；

步骤（3）所用超高效液相色谱参数设置如下：

仪器：Waters ACQUITY UPLC系统；Tetons质谱检测器；

色谱柱：Thermo Scientific Hypersil Gold C₁₈色谱柱，100 mm × 2.1 mm，1.9 μm；柱温：35℃；进样体积：2 μL；流动相：A相为0.1% 甲酸水、B相为乙腈；流速：0.4 ml·min^-1；梯度洗脱，梯度洗脱程序为：0 ~ 2 min，A：95% ~ 95%，B：5% ~ 5%；2 ~ 4 min，A：95% ~65%，B：5% ~ 35%；4 ~ 8 min，A：65% ~ 5%，B：35% ~ 95%；8 ~ 13 min，A：5% ~ 5%，B：95% ~95%；13 ~ 14 min，A：5% ~ 95%，B：95% ~ 5%；14 ~ 15 min，A：95% ~ 95%，B：5% ~ 5%；

质谱条件为：离子源：ESI离子源；离子源温度：150℃；扫描方式：多反应检测模式；毛细管电压：3.0 kV；去溶剂气温度：150℃；去溶剂气流量：1000L·h^-1；锥孔气流量：30L·h^-1；碰撞气流量：0.15mL·min^-1。

2.根据权利要求1所述的大黄甘草汤的质量控制方法，其特征在于，步骤(1)所述的样品溶液的制备方法为：

先取甘草药材，加8倍量的水回流提取1h后，然后加入大黄药材，并加入药材总重量8倍的水，回流提取2次，合并提取液，过滤得到大黄甘草水提液，离心，吸取上清液，过0.22 μm滤膜，得样品溶液，大黄和甘草的重量比为4:1、4:2、4:3、4:4、3:4、2:4或1:4。