[发明专利]抗人bFGF纳米抗体检测bFGF的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测bFGF的试剂盒，该试剂盒含有抗人bFGF纳米抗体，所述的抗人bFGF纳米抗体包含由框架区FR和互补决定区CDR组成的可变区结构域，其特征在于，所述的可变区结构域包含选自以下的CDR1、CDR2和CDR3：

（1）SEQ ID No.1所示的CDR1，SEQ ID No.5所示的CDR2，和SEQ ID No.9所示的CDR3；

（2）SEQ ID No.2所示的CDR1，SEQ ID No.6所示的CDR2，和SEQ ID No.10所示的CDR3；

（3）SEQ ID No.2所示的CDR1，SEQ ID No.5所示的CDR2，和SEQ ID No.9所示的CDR3；

（4）SEQ ID No.4所示的CDR1，SEQ ID No.8所示的CDR2，和SEQ ID No.12所示的CDR3；

（5）SEQ ID No.3所示的CDR1，如SEQ ID No.7所示的CDR2和如SEQ ID No.11所示的CDR3；

所述的试剂盒以具有（1）、（2）、（3）和（4）任一项所示的可变区结构域的抗人bFGF纳米抗体作为一抗；以具有（5）所示的可变区结构域的抗人bFGF纳米抗体作为二抗。

2.根据权利要求1所述的检测bFGF的试剂盒，其特征在于：所述的框架区FR选自下组的FR1、FR2、FR3和FR4：

(1)SEQ ID No.13～15任一氨基酸序列所示的FR1；

(2)SEQ ID No.16～19任一氨基酸序列所示的FR2；

(3)SEQ ID No.20～24任一氨基酸序列所示的FR3；

(4)SEQ ID No.25～27任一氨基酸序列所示的FR4。

3.根据权利要求1所述的检测bFGF的试剂盒，其特征在于：

所述的作为一抗的抗人bFGF纳米抗体的氨基酸序列为如SEQ ID No.28～30、SEQ IDNo.32或SEQ ID No.33的任一项所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所述的检测bFGF的试剂盒，其特征在于：

所述的作为一抗的抗人bFGF纳米抗体的氨基酸序列为如SEQ ID No.33所示。

5.根据权利要求1～4任一项所述的检测bFGF的试剂盒，其特征在于：

所述的作为二抗的抗人bFGF纳米抗体的氨基酸序列为如SEQ ID No.31所示。

6.根据权利要求1所述的检测bFGF的试剂盒其特征在于：

所述的试剂盒为癌症诊断试剂盒。

7.一种检测bFGF的双抗体夹心ELISA方法，其特征在于：

以其氨基酸序列如SEQ ID No.28～30、SEQ ID No.32或SEQ ID No.33的任一项所示的抗人bFGF纳米抗体作为一抗；以其氨基酸序列如SEQ ID No.31所示的氨基酸序列的抗人bFGF纳米抗体作为二抗；该方法并非用于疾病的诊断或治疗。

8.根据权利要求7所述的检测bFGF的双抗体夹心ELISA方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)包被：用含有一抗的溶液对包被板进行包被过夜；

(2)封闭：洗涤包被有一抗的包被板后，进行封闭；

(3)加抗原：洗涤封闭好的包被板，加入待测样本，孵育；

(4)加二抗：洗涤孵育待测样本后的包被板，加入二抗，孵育；

(5)加酶标抗体：洗涤孵育二抗后的包被板，加入HRP标记抗体，孵育；

(6)洗涤包被板后，加入TMB显色液，避光孵育，450nm波长处测量吸光度值。