[发明专利]一种重组蜂毒多肽及其应用

说明书

本发明涉及一种重组蜂毒多肽及其应用，重组蜂毒多肽的氨基酸序列为SEQ ID No.1，通过将UA8短肽与蜂毒肽基因相连接成重组蜂毒融合基因，再构建重组蜂毒多肽融合基因真核表达载U‑melittin‑pPICZα，转入毕赤酵母诱导表达重组蜂毒蛋白并进行表达和纯化得到，本发明相对于蜂毒肽具有更强的抗肿瘤活性和较小的溶血毒性，应用于由于HPV病毒引起的宫颈相关疾病及宫颈癌的预防及治疗。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种重组蜂毒多肽及其应用。

背景技术

宫颈癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，其发病率和致死率在发展中国家女性恶性肿瘤中分别居第二位和第三位，且年轻化态势显著，严重危害了女性的身心健康。据不完全统计，全球2012年新发宫颈癌528000例，致死266000例，东亚人群的宫颈癌发病率为7.9/10万。因我国人口基数大，宫颈癌筛查、防治措施尚未全面推广，近年来发病人数逐年提高，占全球发病总数的1/3。宫颈癌的发病因素复杂，联系最为密切的是高危型人乳头瘤病毒的持续感染。几乎所有的侵袭性宫颈癌及95%的宫颈上皮内瘤变、原位癌病理组织中均可检测出HPV。70~80%的女性一生都感染过HPV，其中10%的女性面临持续性HPV感染的危险状态，但高危型HPV感染虽然会导致高级别CIN和宫颈癌的发生，但多数呈一过性亚临床改变，是因为游离HPV基因组对宿主基因组的稳定性威胁不大，一旦HPV DNA整合进入宿主基因组，将导致一系列基因结构及功能异常，最终使细胞发生恶性转化。E6和E7是主要的致癌蛋白，在HPV整合进入宿主基因组后发挥重要的致癌作用，E6可通过泛素化等途径调节影响p53蛋白的抑癌作用，E7 与pRb结合后可使细胞周期调节失控。因此早期有效抑制HPV及病毒蛋白E6、 E7的表达成为预防宫颈癌的有效途径。

目前宫颈癌治疗中最常用的药物之一顺铂，是主要与DNA链上碱基作用，DNA结合形成交叉键，从而破坏DNA的功能不再复制，高浓度时会抑制RNA及蛋白质的合成，主要副作用为消化道反应、肾脏毒性、骨髓抑制及听神经毒性，目前缺乏有效方法改善其副作用。干扰素（Interferon）是细胞受病毒感染后释放出来的免疫物质。由病毒和病毒以外物质诱发的干扰素分别称为Ⅰ型和Ⅱ型干扰素。干扰素是一类在同种细胞上具有广谱抗病毒活性的蛋白，其活性的发挥又受细胞基因组的调节和控制，涉及RNA和蛋白质的合成。已用于临床的干扰素有三类：干扰素α是病毒诱导白细胞产生的干扰素，β是病毒诱导纤维母细胞产生的干扰素，γ是病毒诱导淋巴样细胞产生的干扰素。不良反应主要是发热、疲乏、肌痛、头痛等流感样症状。其次是轻度骨髓抑制，氨基转移酶、血肌酐升高。但临床中干扰素用于治疗HPV感染效果不佳，HPV感染无法得到有效的控制，开发一种能够有效治疗HPV病毒的药物将会填补该领域的空白。

蜂毒肽占蜂毒干重的45%~50%，是蜂毒的主要成分。研究发现蜂毒具有抗肿瘤、抗病毒、抗细菌、抗炎、降压、镇痛、缓解风湿以及抗凝等重要功能。其中，蜂毒肽的抗肿瘤、抗菌抗病毒作用近年来备受关注。蜂毒肽的独特作用由其结构决定：蜂毒肽作为一种分子量为2840的多肽链，N-端（1-20 aa）是疏水性，C-端（21-26 aa）是亲水性在特定PH及离子浓度时，蜂毒肽自我交联呈α-螺旋四聚体结构，具有膜结合肽和膜蛋白跨膜螺旋的特征，因此既可溶于水，又可溶解细胞发挥细胞毒活性。此外，因蜂毒肽分子量相对较小，现有技术中，蜂毒的临床应用主要有以下几种：（1）结缔组织疾病，如风湿性 和类风湿性关节炎；（2）神经炎和神经痛，如治疗坐骨神经痛、三叉神经痛、 枕神经痛、背神经根炎等；（3）心血管疾病，如高血压动脉粥样硬化症、静脉 血栓形成、血栓闭塞性脉管炎和动脉内膜炎；（4）变应性疾病，如支气管哮喘。与目前临床应用的抗肿瘤药物相比，还具有免疫原性略低的优势。在卵巢癌、肝癌、胃癌、乳腺癌等常见肿瘤的研究中，蜂毒肽对肿瘤细胞生长抑制作用、直接溶解作用均得到证实。但是蜂毒肽在抗HPV病毒及宫颈癌治疗中的应用尚无报道。根据宫颈癌的发病机制，蜂毒肽的抗病毒、抗肿瘤等多种治疗特性将适用于HPV感染的治疗，进而达到宫颈癌的防治目的。