[发明专利]检测CYP2C8点突变的引物和方法

说明书

本发明公开了一种CYP2C8*2和CYP2C8*3分型的特异性引物和方法，其包括扩增CYP2C8*2多态性位点的1对引物；扩增CYP2C8*3多态性位点的2对引物。利用PCR扩增技术和Sanger测序技术，本发明可快速地将CYP2C8分型相关的位点检测出来。利用本发明完成的检测结果准确，可为临床药理学家进行临床个体化给药、以及新药候选化合物的结构优化和进一步筛选提供有用信息。

技术领域

本发明属于医学及生物技术领域，一种使用PCR及Sanger测序法检测CYP2C8点突变的方法和引物。

技术背景

细胞色素超级家族是一大类血红素蛋白，广泛地存在于各种生命体中，在氧化代谢众多的生命体外源性化学物质方面发挥重要作用。不同的个体对于药物以及其他毒性物质会出现不同的反应，很多这种差异性已被证实是由于人体细胞色素P450的基因多态性引起的。另外，负责代谢生命体内源性物质的细胞色素P450的基因多态性形也是某些特定遗传疾病的致病原因。CYP2C8在人体肝脏微粒体细胞色素中约占7％，至少负责代谢5％的临床药物。多种重要的药物都可作为CYP2C8的底物，包括抗癌药物、抗心律不齐药物、降血糖药物、抗癫痫药物、HMG-CoA还原酶抑制药物等。CYP2C8基因多态性的研究对于实现用药个体化能发挥重要的作用。另外，一些由CYP2C8基因多态性导致的特定疾病也已见报道。到目前为止，已有10多种CYP2C8的基因多态性被报道，其中发生频率较高为突变体CYP2C8*2(I269F)和突变体CYP2C8*3(R139K和K399R)。CYP2C8*2的突变发生在5号外显子上，第269位氨基酸由异亮氨酸突变为苯丙氨酸。其发生频率具有明显的种族差异性，在非洲人中的突变频率为15％-20％，在欧洲、亚洲人中鲜有或未发现该突变体。CYP2C8*3的突变是两个SNP的紧密连锁，分别发生在3号和8号外显子上，第139位氨基酸由精氨酸突变为赖氨酸，第399位赖氨酸突变为精氨酸。CYP2C8*3是最常见的CYP2C8的基因多态性之一，主要存在于白人中(等位基因频率为10％-23％)，在非洲和亚洲人群中较为少见。携带CYP2C8*3纯合突变(A/A)和杂合突变(G/A)基因型患者对紫杉醇的清除活性大大降低，约为野生型患者的15％，这可能引起药物在体内更多的积累，因此CYP2C8*3带有A的患者应适当减少用药量。CYP2C8的紫杉醇6ɑ羟基化活性的个体间差异可达38倍，导致紫杉醇的临床治疗效果和药物安全性参差不齐。因此，对于CYP2C8基因分型的研究具有十分重要的学术意义和临床意义。

鉴于CYP2C8基因在患者中的特点，其基因分型情况可能为患者用药指导提供重要的分析依据，通过分析CYP2C8基因相关突变进行预后评估是具有前景的技术研究方向。因此，如何快速全面的获得检测对象基因分型的数据，成为当前亟需解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的是提供CYP2C8基因分型的引物和方法，综合应用PCR扩增和基因测序技术，可用于快速检测检测CYP2C8*2和CYP2C8*3两种常见基因型。所述检测CYP2C8基因多态性的引物，包括：

扩增CYP2C8基因的引物，其碱基序列为：

CYP2C8-1F 5’-TTCAATCAGGGCTTGGTGTA -3’

CYP2C8-1R 5’-TATTTCAAGAAGAGGGTCTATGC -3’

CYP2C8-2F 5’-CACTTTCTTCCTTGGCTGTGA -3’

CYP2C8-2R 5’-GACCTTTTATTCCTACACCCTATG -3’

CYP2C8-3F 5’-TGTCTGGCTGGACCTGAGTT -3’

CYP2C8-3R 5’-GGTGGAGCACATGGGTGTTA -3’

进一步地，还包括测序引物，其碱基序列为：