[发明专利]一种针对GC33-3-1抗体具有特异性识别的荧光探针的合成以及应用

说明书

本发明公开一种针对GC33‑3‑1抗体具有特异性识别的荧光探针的合成以及应用。该探针合成路线简单，反应条件温和，后处理简单方便。该荧光探针标记人血清蛋白（HSA）后荧光强度大大增强，荧光探针标记HSA后再将其用于识别GC33‑3‑1抗体。与其他检测抗体的方法相比，该方法具有操作简便，响应灵敏，以及具有选择性等优点，在生物领域有较好的应用前景；。

技术领域

本发明属于生物分析检测领域，具体涉及一种用于特异性识别GC33-3-1抗体荧光探针的合成及其应用。

背景技术

人血清蛋白（HSA）是血清中最丰富的蛋白质，也是最重要的药物载体蛋白。它对于许多内源性和外源性脂质的转运，分布和代谢，包括脂肪酸，氨基酸，金属离子和许多药物，并且对血液的混合渗透压有着中重要的作用。人血清白蛋白（HSA）是一种高分子量血浆蛋白。它是由585个氨基酸组成的单一链。像其他哺乳动物白蛋白一样，人体白蛋白含有17个二硫桥和一个游离硫醇Cys34。在大多数情况下，蛋白质与药物的相互结合作用会显著影响药物的表观分布容积，也会影响药物的清除率。因此，药物与蛋白结合的研究可以提供有关药物结构特征的信息，确定药物的治疗效果，在化学和临床研究领域研究药物与血清白蛋白的相互作用都是非常重要的。

Glypican-3（GCP3）是细胞膜表面糖蛋白，属于 glypican 家族中的一种，是肝细胞癌（Heptocellular carcinoma，HCC）表面特异性标志物。GCP3在HCC中会高度表达，在正常的肝组织中无表达，所以GCP3可以作为肝癌治疗的理想标志物。GCP3功能的缺失会导致过度生长和畸变（Simpson-Golabi-Behmel）综合征，这是一种X染色体异常的疾病。GCP3缺失小鼠表现出过度生长和一些畸变的表型。在小鼠中GCP3过表达会抑制肝细胞增殖和肝的再生。GC33-3-1抗体是高亲和力抗GCP3抗体，具有很强的抗肿瘤活性。因此，通过合成苯并咪唑酮类荧光探针标记人血清蛋白（HSA），再识别GC33-3-1抗体，从而检测到人体内的肝癌细胞。该荧光探针具有灵敏度高，选择性好，操作简单等优点。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种用于特异性识别GC33-3-1抗体的荧光探针，该荧光探针与超纯水溶液、Tris-HCl溶液按照1：1：1的比例配成混合溶液时荧光信号较微弱，当该荧光探针与人血清蛋白溶液、Tris-HCl溶液按照1：1：1的比例配成混合溶液荧光信号明显增强。

本发明的目的之一提供一种可用于特异性识别GC33-3-1抗体的荧光探针的合成方法和应用，该方法具有操作方便，原料易得，提纯简单等优点。

本发明所有的技术方案为：

本发明提供了一种可用于特异性识别GC33-3-1抗体的荧光探针，该探针的结构式如下：

本发明提供了所述荧光探针的制备方法，该方法步骤如下：

具体合成步骤如下：

（1）中间体化合物F1的合成

将4,6-二氯嘧啶和邻苯二胺溶于异丙醇中，并向该反应液中加入N,N-二异丙基乙胺，将反应液加入微波反应中，150℃反应10 min，减压除去异丙醇，得化合物F1。

（2）中间体化合物F2的合成

将化合物F1和羰基-2-咪唑溶于四氢呋喃溶液中，加入吡啶作催化剂，在氮气保护下65℃油浴回流，过夜，减压除去溶剂，经硅胶柱分离，得化合物F2。

（3）荧光探针F3的合成