[发明专利]一种新的蛋白提取试剂及方法在审
| 申请号： | 201810577627.1 | 申请日： | 2018-06-06 |
| 公开（公告）号： | CN108727464A | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 吴梦云;李娅莎;赵丽;杨珂;谭彬;徐小惠;田娜 | 申请（专利权）人： | 重庆医科大学附属儿童医院 |
| 主分类号： | C07K1/14 | 分类号： | C07K1/14 |
| 代理公司： | 重庆弘旭专利代理有限责任公司 50209 | 代理人： | 文巍 |
| 地址： | 400014 *** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 蛋白提取 检测灵敏度 检测问题 微量细胞 巯基乙醇 甘氨酸 溴酚兰 甘油 | ||
1. 一种蛋白提取试剂，每10ml水溶液中包括以下组分：Tris14.5~15.5mg、甘氨酸74~75mg、SDS 202-208mg、溴酚兰10~12mg、Tris-HCl 0.5~0.6ml、甘油0.8~1.2ml、β-巯基乙醇0.4-0.6ml。
2. 如权利要求1所述的蛋白提取试剂，每10ml水溶液含有Tris 15mg、甘氨酸75mg、SDS205mg、溴酚兰10mg、pH6.8的Tris-HCl 0.5ml、甘油1ml、β-巯基乙醇0.5ml。
3.如权利要求1或2所述的蛋白提取试剂，用量为每1x106细胞加入400μL~600μL所述试剂；或者24孔板每孔加200μL~300μL所述试剂。
4.采用权利要求1、2或3所述蛋白提取试剂提取蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）收集细胞，清洗后按照每1x106细胞加入400μL~600μL所述蛋白提取试剂；
（2）静止30秒到2分钟；
（3）煮沸10~20分钟使蛋白变性，冷却。
5.如权利要求4所述提取蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）配制蛋白提取试剂：按比例加入Tris、甘氨酸、SDS、溴酚兰、Tris-HCl、甘油、β-巯基乙醇、水；
（2）对于贴壁细胞：去除培养液，用缓冲液洗，按照24孔板每孔加入200μL~300μL所述试剂；轻轻吹打混匀，使提取液和细胞充分接触；
对于悬浮细胞：离心收集细胞，打散细胞，按照24孔板每孔细胞加入200μL~300μL，轻轻吹打混匀，使提取液和细胞充分接触；
（3）100℃或沸水浴加热15分钟，以充分变性蛋白；蛋白变性后存于-20℃备用。
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