[发明专利]TOP2A自身抗体作为肺癌诊断标志物的用途

说明书

本发明公开了TOP2A自身抗体作为肺癌诊断标志物的用途，还公开了一种TOP2A自身抗体作为肺癌诊断标志物的筛选和鉴定方法。本发明提供一种操作简单、成本低、准确性高、无创伤的应用于临床的肺癌诊断的血清生物标志物。本发明研究发现应用ELISA方法进行血清TOP2A自身抗体的检测，可以较准确地将肺癌患者和正常人，以及肺病慢性疾病患者鉴别开来，并可以用于肺癌的早期诊断。在此背景下提供此方便、快捷、有效的检测肺癌患者，可用于临床的肺癌早期诊断。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及TOP2A自身抗体作为肺癌诊断标志物的用途，用于肺癌早期诊断。

背景技术

肺癌是中国，以及全球发病率及死亡率第一的恶性肿瘤。肺癌的临床表现复杂多样，且早期肺癌表现隐匿且多样化，临床特征及体征不明显，仅表现为咳嗽、咯痰、胸痛、发热、体力下降等非特异性症状，未进行及时的治疗。因此，大部分肺癌患者发现时已经处于晚期。有临床数据显示，有近60％的患者就诊时已经处于肺癌晚期。肺癌晚期的5年生存率仅为16％左右，而肺癌早期(Ⅰ期)的五年生存率可以高达70％。可见肺癌的早期发现、早期诊断是降低肺癌发病率和死亡率的关键环节。

目前临床上有多种用于肺癌的检测手段，主要包括无创检查(CT，X线胸片等)和一些有创检查(纤维支气管镜、脱落细胞学检查、经CT定位穿刺活检等)。X线胸片方便、快速、无创等优势，对肺癌诊断有重要意义。美国国家肺癌筛查试验的随机对照研究结果显示，通过采用LDCT对肺癌高危人群进行筛查,可使肺癌病死率下降20％,提高12％早期肺癌的检出率。国际早期肺癌行动计划I期肺癌的检出率达85％,预期10年生存率可以达到88％。虽然LDCT在一些地区进行的筛查研究取得了一定的研究进展，但有一定的不足之处。首先，LDCT能在25％的高危人群中发现结节，经过进一步的检查和追踪，其中只有4％最终被诊断为肺癌。另一方面，所有的肺癌患者中只有30％符合LDCT的高危人群筛查标准，说明大部分肺癌患者也无法通过LDCT筛查被发现。近年来，血清生物学标志物由于开发创伤性小，操作简单，筛查范围广，检测效率高等优点而受到关注。目前临床上用的血清生物学标志物有糖链抗原(CA125、CA199)，细胞角蛋白19片段抗原(CYFRA21-1)，癌胚抗原(CEA)等，但是尚未发现一种灵敏度及特异度均很高的肿瘤标志物，因此单项检测对肺癌有一定的局限性。

肿瘤的发生可归结为一系列肿瘤相关基因结构或者功能的异常，肿瘤抗原(tumor-associated antigens,TAAs)就是这些异常基因所表达的一些在质或者量上异常的蛋白质或者多肽，其产生的抗体称为抗TAA自身抗体。由于肿瘤抗原主要分布在肿瘤细胞内、膜表面或者血清中，不同程度地激活机体特异性或非特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答。抗TAAs自身抗体在正常人和非肿瘤患者血清中不存在或滴度很低，患者血清中自身抗体水平的升高往往早于肿瘤症状的出现，并且它能够在血清中持续稳定存在，而其它的标志物，包括TAA本身，在其被肿瘤细胞释放后被快速降解或者在其进入血液循环后的很短时间内就能够被机体清除。因此检测抗-TAAs的自身抗体可以作为早期肿瘤诊断的血清标志物。

目前筛选生物学标志物的技术主要有重组cDNA表达文库血清学分析(Serological analysis of expression cDNA libraries，简称SEREX)、噬菌体展示技术、蛋白质微阵列、血清蛋白质组学技术(Serological proteome analysis,简称SERPA)等。SEREX方法是目前国际上普遍使用的一种发现和鉴定肿瘤相关抗原的血清学技术。本实验室前期采用SEREX技术,用5例肺癌患者首先进行异体血清的预吸收，对所构建的cDNA文库进行免疫筛选，阳性克隆做DNA测序，结果在NCBI网站上用BLAST软件搜索Genbank，使用Blastn和Blastp进行同源比对分析，从而判断该基因序列是已知还是未知。结果显示70个阳性克隆过代表63个不同的基因其中有35个已知的基因，与细胞的分化、代谢及信号转导有关系，还有26个功能未知的基因。