[发明专利]杂交瘤细胞、抗人亲环素蛋白A的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了杂交瘤细胞、抗人亲环素蛋白A的单克隆抗体及其应用。本发明用传统的细胞杂交瘤制备技术，获得稳定分泌抗人亲环素蛋白A(Cyclophilin A，CypA)蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCC NO：C201126，所分泌的抗体可以特异性的识别人体多种组织中表达的CypA蛋白分子，为癌症和炎症的诊断及治疗提供了新的有效工具。

技术领域

本发明涉及一种与人亲环素蛋白A(Cyclophilin A，CypA)蛋白特异性结合的单克隆抗体和产生该抗体的杂交瘤细胞株，以及该抗体轻、重链可变区基因和相应基因所编码的氨基酸序列。所述抗体用于，如检测和定量细胞和组织中CypA的表达水平，及在制备用于诊断或治疗肿瘤和炎症方面药物中的应用。

背景技术

Cyclophilin A又称亲环素蛋白A(以下简称为CypA)，是亲环素蛋白家族中的主要成员，分子量约18kDa。CypA是免疫抑制药物环孢菌素(Cyclosporine A，CsA)在细胞内的主要受体，二者形成的复合物可以通过抑制钙调神经素的磷酸酶活性，进而阻止活化T细胞核因子(NF-ATs)向核内的移位以及下游相关基因的转录。CypA还具有肽基脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-tranisomerase，PPIase)活性，可以催化蛋白折叠和构象变化时肽基脯氨酰键的顺反异构化。CypA的顺反异构酶活性影响了细胞内蛋白质的转运、线粒体功能的维持、mRNA前体的加工、多蛋白复合体结构完整性的维持等多种重要的细胞生理过程。

癌症是困扰全球人类健康的主要疾病之一，目前癌症的诊断和治疗仍然缺乏有效的技术手段。近年来，随着蛋白质组学在肿瘤研究中的应用，极大的推动了人们在蛋白分子水平对肿瘤的发生和进展的认识。通过2D电泳、质谱等研究手段，人们筛选到大量与肿瘤的发生和进展关系密切的新的蛋白标志物，为肿瘤的诊断和治疗提供了更多的选择。CypA与肿瘤的关系最早是由Michael J.Campa等在2003年时，使用“基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)”技术，比较正常肺组织和非小细胞肺癌组织样本中蛋白质的表达差异时，发现CypA在肺癌组织中表达显著升高达7倍之多。紧随其后，又有多名研究者先后报道了CypA在胰腺癌、食管癌、结直肠癌乳腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、绒毛膜癌、黑色素瘤等多种癌组织中，相对于正常组织表达增高的现象。已有文献报道CypA在非小细胞肺癌和子宫内膜癌组织中的表达升高与癌组织的分级和病人预后间存在显著相关性。CypA在癌组织细胞中的表达增高可增加肿瘤细胞对低氧和化疗药物诱导的细胞凋亡效应的抵抗能力，这种作用与CypA的肽基脯氨酰顺反异构酶活性紧密相关。CypA的肽基脯氨酰顺反异构酶活性可调节肿瘤细胞内多种具有重要功能的蛋白质构象成熟，并参与调节了与肿瘤的增殖和转移相关的蛋白磷酸化信号通路的活化。这些结果都提示了CypA在癌的发生和进展过程中可能具有重要的作用，并有可能成为一个重要的癌症诊断标志物和预后的判断指标。目前尚无针对CypA蛋白的单克隆抗体或多肽作为癌症诊断或治疗的药物报道。