[发明专利]一种筛选金银花中微量神经氨酸酶抑制剂的方法

权利要求书

1.一种从金银花中筛选神经氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，步骤如下：

(1)将金银花粉与提取溶剂置于塞式烧瓶中，一定温度下超声提取；将超声后的滤液过滤合并，减压蒸干，用甲醇复溶后，过滤膜备用；

(2)将步骤(1)中制得的样品通过半制备液相色谱系统进行样品分段，将洗脱得到的高组分含量进行合并，得到组分A、组分B、组分C、组分D；(3)

通过高效液相色谱系统对组分A、组分B、组分C、组分D进行梯度洗脱分离，通过质谱仪进行质谱鉴定；所述组分A,组分B,组分C,组分D的液相分离条件如下：

A组：Xbridge Amide，规格为4.6×250mm，3.5μm的色谱柱，洗脱溶剂为A相-含0.8％甲酸，10mM甲酸铵的水和B相-乙腈；梯度洗脱程序为：0min，96％B相；0-5min，96％～93％B相；5-20min，93％～93％B相；20-25min，93％～82％B相；25-30min，82％～82％B相；30-50min，82％～70％B相；50-51min，70％～50％B相；51-60min，50％B相；流速为1.0mL/min，检测波长设为262nm，注射量为10μL；

B组：Symmetry C18，规格为4.6×250mm，5μm的色谱柱，洗脱溶剂为A相-含0.8％甲酸的水和B相-乙腈；梯度洗脱程序为：0min，10％B相；0-5min，10％～13％B相；5-15min，13％～13％B相；5-20min，13％～14％B相；20-45min，14％～19％B相；45-50min，19％～25％B相；50-51min，25％～100％B相；51-60min，100％B相；流速设定为0.8mL/min，检测波长设为280nm，进样量为20μL；

C组：XSELECTTM HSS T3，规格为3×150mm，3.5μm的色谱柱，洗脱溶剂A相-含0.8％甲酸，10mm甲酸铵的水和B相-乙腈；梯度洗脱程序为：0min，14％B相；0-20min，14％-14％B相；20-30min，14％-17％B相；30-45min，17％-23％B相；45-60min，23％-25％B相；60-75min，25％-35％B相；75-85min，35％-100％B相；85-95min，100％B相；流速为0.5mL/min，检测波长设为262nm；进样量为10μL；

D组：kromasil C18，规格为4.6×250mm，5μm的色谱柱，洗脱溶剂为A相-含0.5％甲酸的水和B相-乙腈；梯度洗脱程序为：0min，10％B相；0-15min，10％-20％B相；15-20min，20％-22％B相；20-35min，22％-23％B相；35-45min，23％-50％B相；45-55min，50％-100％B相；55-60min，100％B相；流速设定为0.8mL/min，检测波长设为262nm；进样量为10μL；

质谱扫描条件如下：扫描范围为m/z 50-1500；破碎电压设定为100V，毛细管电压设定为4500V，温度为350℃；高纯氮的流量控制在10.0L/min；所述D组的进样量为2μL，所述A组,B组,C组进样量均为5μL。

2.如权利要求1所述的一种从金银花中筛选神经氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，步骤(1)的具体操作为：将金银花粉和提取溶剂置于塞式烧瓶中，在25℃下控温条件下超声提取30min，重复一次；将超声后的滤液过滤合并，减压蒸干；用50％甲醇复溶，过0.45μm滤膜备用。

3.如权利要求1所述的一种从金银花中筛选神经氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，所述金银花粉：提取溶剂＝10g：1L。

4.如权利要求1所述的一种从金银花中筛选神经氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，步骤(2)的具体操作为：将步骤(1)中制得的样品通过RIGOL-3245半制备液相色谱系统进行样品分段，将洗脱得到的高组分含量进行合并，得到组分A、组分B、组分C、组分D；所述半制备液相色谱系统采用梯度洗脱条件，流动相为：A相-含0.2％甲酸的水和B相-甲醇，流速为3mL/min，检测波长为280nm，进样量为200μL。