[发明专利]一种蓝莓种苗的高效脱毒繁育方法

权利要求书

1.一种蓝莓种苗的高效脱毒繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)外植体的选择

生长季节，选取健壮的嫩枝或半木质化新稍，切割为1-2cm的茎段，并于超净工作台上用70％酒精消毒1-2min，0.1％升汞灭菌6-10min，最后用无菌水冲洗4-6次；

(2)诱导培养

将经步骤(1)处理后的外植体直接接入改良的WPM诱导培养基中，并于23-25℃下进行诱导培养，待叶芽萌发后，取所述叶芽的芽尖继续培养，即得蓝莓组培苗；其中，改良的WPM诱导培养基具体为：WPM+蔗糖+琼脂+激素，光照强度为1600-2500LX，光照时间保持11-13h/d；

(3)热处理

将蓝莓组培苗在40-48℃下热处理2-2.5d；

(4)化学药剂处理

切取步骤(3)处理后的组培苗的茎尖，并将所述茎尖置于含有病毒唑的培养基中，在21-25℃条件下继续培养45-55d；其中，含有病毒唑的培养基具体为：WPM+蔗糖+琼脂+激素+病毒唑，且病毒唑的浓度具体为0.2-0.3mg/L；

(5)继代培养

将步骤(4)处理后的茎尖在继代培养中进行继代培养，每30-40d一代，继代4-5次，得新的蓝莓组培苗；其中，继代培养的配方同步骤(2)中改良的WPM诱导培养基；

(6)瓶内生根培养

继代培养后，将新的蓝莓组培苗接入到已装有改良的1/2WPM生根培养基的试管瓶中，并于20-25℃下进行生根培养60-70d；其中，改良的1/2WPM生根培养基具体为：1/2WPM+蔗糖+琼脂+激素；培养方式为：先暗培养一周，再进行1600-2500LX强度的光照培养，以培养出完整的小植株；

(7)瓶外生根培养

将步骤(6)所得的小植株继续转移至改良的1/6WPM瓶外生根培养基中，以珍珠岩为支持物，于20-25℃下进行生根培养30-40d；其中，改良的1/6WPM瓶外生根培养基具体为：1/6WPM+蔗糖+琼脂+激素，光照强度为2000-2500LX，光照时间保持11-13h/d；

(8)炼苗与移栽

将步骤(7)所得的生根苗放于光线较好的室内，并揭开盖；炼苗3-5d后，将其移至温室大棚进行穴盘培育，培育期间，注意肥水管理和遮阴；55-65d后，将其移至棚外进行后续的壮苗培育。

2.根据权利要求1所述的蓝莓种苗的高效脱毒繁育方法，其特征在于，所述步骤(2)中改良的WPM诱导培养基中，蔗糖浓度为2-3％，琼脂浓度为0.60-0.65％，激素为0.5-5.0mg/L的6-BA、0.01-0.05mg/L的德卡林碱和0.05-0.25mg/L的NAA。

3.根据权利要求1所述的蓝莓种苗的高效脱毒繁育方法，其特征在于，所述步骤(4)中含有病毒唑的培养基中，蔗糖浓度为2-3％，琼脂浓度为0.60-0.65％，激素为0.5-5.0mg/L的6-BA、0.01-0.05mg/L的德卡林碱和0.05-0.25mg/L的NAA。

4.根据权利要求1所述的蓝莓种苗的高效脱毒繁育方法，其特征在于，所述步骤(6)中改良的1/2WPM生根培养基中，蔗糖浓度为2-3％，琼脂浓度为0.60-0.65％，激素为0.5-5.0mg/L的6-BA、0.01-0.05mg/L的德卡林碱和0.05-0.25mg/L的NAA。

5.根据权利要求1所述的蓝莓种苗的高效脱毒繁育方法，其特征在于，所述步骤(7)中改良的1/6WPM瓶外生根培养基中，蔗糖浓度为2-3％，琼脂浓度为0.60-0.65％，激素为0.5-5.0mg/L的6-BA、0.01-0.05mg/L的德卡林碱和0.05-0.25mg/L的NAA。

6.根据权利要求1所述的蓝莓种苗的高效脱毒繁育方法，其特征在于，所述步骤(7)中作为支持物的珍珠岩具体为90-110℃条件下烘干后的珍珠岩。

7.根据权利要求1所述的蓝莓种苗的高效脱毒繁育方法，其特征在于，所述步骤(7)中生根培养的生根率达90％以上。