[发明专利]一种细胞保护剂及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种细胞保护剂，该细胞保护剂含有以下组分：终浓度为10～100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，终浓度为9g/L的氯化钠，终浓度为10～40g/L的葡萄糖，终浓度为1～20g/L的蔗糖，终浓度为1～20g/L的丙氨酰谷氨酰胺。本发明还提供了上述细胞保护剂的制备方法和应用。本发明将细胞保护剂与血液按照一定的比例混合后，可于5～25℃条件下，保存48小时左右而不影响血液中淋巴细胞的活性。为血液样本的保存和运输提供了方便。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种保护血液中T淋巴细胞活性的细胞保护剂及其制备方法和应用。

技术背景

目前，市面上加入静脉血中的抗凝剂一般为复方柠檬酸钠保存液(ACD)、EDTA或肝素。为了保证淋巴细胞的活力，加入复方柠檬酸钠保存液(ACD)、EDTA或肝素的抗凝血必须在6小时之内使用。抗凝血的保存时间如果超过10小时，其中的淋巴细胞会部分或者全部死亡，无法进行后续的实验或检测。所以需要开发一种新的细胞保护剂，在血液离体后，保护血液中的淋巴细胞的活力，以为血液的保存及运输提供方便。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种保护血液中T淋巴细胞活性的细胞保护剂及其制备方法和应用。

为了达成上述的目的，本发明提供了一种新的细胞保护剂。该保护剂包括缓冲液、盐类、糖类、氨基酸等。其中缓冲液为三羟甲基氨基甲烷，盐类为氯化钠，糖类为葡萄糖和蔗糖，氨基酸为丙氨酰谷氨酰胺。将该保护剂与全血以一定的比例混合后，在5～25℃条件下，全血样本可以保存或运输48小时而不影响淋巴细胞的活性。

本发明采用以下技术方案：

一种细胞保护剂，所述细胞保护剂含有以下组分：终浓度为10～100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，终浓度为9g/L的氯化钠，终浓度为10～40g/L的葡萄糖，终浓度为1～20g/L的蔗糖，终浓度为1～20g/L的丙氨酰谷氨酰胺。

如上所述的细胞保护剂，优选的，所述细胞保护剂含有以下组分：终浓度为20～50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，终浓度为9g/L的氯化钠，终浓度为10～20g/L的葡萄糖，终浓度为10～20g/L的蔗糖，终浓度为1～10g/L的丙氨酰谷氨酰胺。

如上所述的细胞保护剂，更优选的，所述细胞保护剂含有以下组分：终浓度为20mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，终浓度为9g/L的氯化钠，终浓度为20g/L的葡萄糖，终浓度为10g/L的蔗糖，终浓度为5g/L的丙氨酰谷氨酰胺。

如上所述的细胞保护剂，更优选的，所述细胞保护剂的pH值为7.1-7.5。

一种上述细胞保护剂的制备方法，包括以下步骤：

用超纯水配制上述终浓度的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，在该三羟甲基氨基甲烷缓冲液中分别加入上述终浓度的氯化钠、葡萄糖、蔗糖、丙氨酰谷氨酰胺，然后用6mol/L的HCl溶液调节pH至7.1～7.5，得到所述细胞保护剂。

一种上述细胞保护剂在用于保护血液样本中T淋巴细胞活性中的应用。

如上所述的细胞保护剂的应用，更优选的，在具体使用时，所述细胞保护剂与血液样本的混合体积比例为1:10-1:100。

如上所述的细胞保护剂的应用，更优选的，在具体使用时，所述细胞保护剂与血液样本的混合体积比例为1:100。

如上所述的细胞保护剂的应用，更优选的，在具体使用时，所述细胞保护剂与血液样本混合后的保存温度为5～25℃。

如上所述的细胞保护剂的应用，更优选的，在具体使用时，所述细胞保护剂与血液样本混合后的保存和运输时间长达48小时。

本发明具有与以下有益效果：