[发明专利]一株解淀粉芽孢杆菌、发酵产物及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌、发酵产物及其制备方法与应用。该菌株名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)E3，于2017年12月7日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2017768；该菌株能有效抑制水稻基腐病菌对水稻种子的侵染，提高萌芽率，可作为生防菌应用于水稻基腐病的防治。本发明还提供了所述菌株的发酵原液的制备方法，制备方法简单，易于操作。本发明还提供了所述菌株的抗菌脂肽及其提取方法，该抗菌脂肽对多种植物病原菌表现出抑制作用，具有较广的抑菌谱，可用于开发高效、广谱、低毒、环保的微生物菌剂。

技术领域

本发明属于生物高技术领域，特别涉及一株解淀粉芽孢杆菌、发酵产物及其制备方法与应用。

背景技术

在农业生产过程中，植物病原菌引起植物病害严重影响植物的生长发育和产量，甚至导致植物死亡。目前，植物病害防治主要依赖化学农药，化学农药在农产品的安全生产中做出了巨大贡献，但化学农药普遍使用和农药用量的增加产生了一系列问题，使某些病原菌的抗性增加，同时会造成环境污染，因此生物农药的开发迫在眉睫，利用微生物来抑制植物病原菌为病害的生物防治提供了可能。其中，芽孢杆菌是自然界中广泛存在的一种非致病性细菌，能产生多种抗菌物质，是植物病害生物防治的研究热点，因其菌体本身及其产生的抗菌物质在控制病害发生、促进植株生长等方面均有良好的表现，且它们易于繁殖，适应环境能力强，在植物病害生物防治中显示出了广阔的应用前景。

生物防治是利用生防菌自身或生长过程中的次级代谢产物，通过拮抗、寄生、捕食等作用以及与致病菌竞争生存空间和营养物质等途径，抑制致病微生物的生长繁殖，来防治植物病害，具有绿色、安全、无污染的优点。刘永锋等从土壤中分离的枯草芽孢杆菌菌株的分泌液对西瓜枯萎病菌的抑制率为74％，对水稻纹枯病菌、水稻稻曲病菌抑制率分别为95.4％和100％，应用于田间大面积防治水稻纹枯病获得较好的防病效果。Kaewklom等从解淀粉芽孢杆菌SP113LM中分发现了一种新型细菌素PPB，能对李斯特氏菌(L.monocytogenes)等微生物的生长有强烈的抑制作用，并且发现PPB还具有广谱的抑菌活性。

已经商品化的芽孢杆菌菌株有美国的B.subtilis GB03、B.subtilis MB1600、B.subtilis QST713和B.amyloliquefaciens FZB24等，分别可以用来防治由Fusarium和Rizoctonia引起的豆类、麦类、棉花和花生等的根部病害；Liming Wu等发现FZB42能对水稻白叶枯(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)和水稻条纹斑病(Xanthomonas oryzaepv.oryzicola)有很好的防治效果。还有日本研发的B.subtilis RB14和B.subtilisNB22GB03，澳大利亚研发的B.subtilis A-13等生防菌株。

水稻基腐病菌(Dickeya zeae)，菌体短杆状，单生，两端钝圆，具周生鞭毛，无芽胞和荚膜，革兰氏染色为阴性，细菌在牛肉浸膏蛋白腺琼脂(NA)培养基上培养菌落颜色初乳白色后变为土黄色，菌落呈变形虫状，无光泽，厌气生长。

水稻细菌性基腐病在水稻整个生育期均可发生，在种子萌发的时候侵入，病菌的侵入会使种子或萌芽腐烂，在水稻的分蘖期至灌浆期均可发病，分蘖期发病的水稻病株，最初是心叶青卷，之后心叶枯黄，基部开始变褐腐烂；在水稻孕穗期以后发病，植株失水青枯，有的病株会出现青枯死苗现象，一部分植株形成枯孕穗、半枯穗或枯穗，病株基部腐烂的部位加大，并伴随有少量倒生根。

化学药剂是目前防控水稻基腐病的有效途径之一，水稻细菌性基腐病的发生和流行快，一般在病害发生后才会施药防治，往往容易错过最佳防治时间。