[发明专利]一种毒三素链霉菌发酵产利普司他汀的培养基及方法

说明书

本发明涉及一种毒三素链霉菌发酵产利普司他汀的培养基及方法，具体涉及一种用于提高毒三素链霉菌生产利普斯他汀的培养基，该发酵培养基中包含大孔树脂，还涉及发酵工艺，包括以下步骤：将毒三素链霉菌(Streptomyces toxytricini)经斜面活化和种子扩大培养后，接种至发酵培养基中，发酵培养，获得代谢产物利普斯他汀。本发明通过对毒三素链霉菌的发酵培养基进行改良，添加大孔树脂到发酵培养基中解除产物抑制作用，为微生物提供有利的生长环境，促进发酵产物产量的提高，消除代谢产物利普斯他汀堆积对菌体生长的影响，使得发酵培养基更加适合菌体生长，显著提高利普斯他汀的产量，本发明操作简单，有效克服现有发酵方法的不足，便于大规模工业生产，降低生产成本。

技术领域

本发明涉及一种毒三素链霉菌发酵产利普司他汀的培养基及方法，具体涉及一种用于提高毒三素链霉菌生产利普斯他汀的培养基及发酵工艺。

背景技术

利普斯他汀(lipstatin)是毒三素链霉菌(Streptomyces toxytricini)的代谢产物，能选择性抑制胃肠道中胰脂肪酶的活性，减少脂肪的分解和吸收。其四氢衍生物奥利司他(orlistat)已被罗氏公司(Roche lnc.)成功开发为减肥药--赛尼可，是目前唯一作为非中枢神经系统作用而上市的治疗肥胖症的药物。

利普斯他汀的发酵生产、培养基改良及工艺优化方法描述见于专利US2005089978A1、US8501444、EP0803576、WO2007134836A1、WO2004003212、CN103320481B、CN103820510 B、CN103820510 B等。美国专利US2005089978A1和US8501444描述了采用流加补料或中间补料进行利普斯他汀发酵生产的工艺。欧洲专利EP0803576和国际专利WO2007134836A1描述了发酵过程中通过添加前体物亚油酸、辛酸和N-甲酰基-L-亮氨酸或亮氨酸来提高利普斯他汀的工艺，但是发酵水平较低。国际专利WO2004003212描述了利用不同淀粉底物的培养基，发酵水平为1.486g/L；美国专利US20110014664A1描述了亚油酸和γ-9脂肪酸的结合利用，显著提高了利普斯他汀的产量。中国专利CN103320481B描述了通过溶解氧控制调控菌株代谢，提高了利普斯他汀的产量；中国专利CN103820510B描述了通过对发酵前体物和金属离子的添加组合进行优化，提高了利普斯他汀发酵效价。

现有记载的有关利普斯他汀发酵工艺方面的专利主要集中在发酵培养基组成的优化及发酵过程的控制，或存在发酵单位低、或存在发酵水平不稳定等问题。

发明内容

本发明要的目的是提供了一种提高毒三素链霉菌发酵产利普斯他汀的培养基及发酵的方法，添加树脂能解除产物抑制作用，为微生物提供有利的生长环境，促进发酵产物产量的提高。

本发明是这样实现的：

本发明首先提供了一种毒三素链霉菌发酵产利普斯他汀的培养基，该发酵培养基中包含大孔树脂，即在常规发酵培养基中加入大孔树脂。

进一步地：

所述大孔树脂是以苯乙烯-二乙烯基苯共聚体为骨架的非极性大孔树脂。优选地，所述大孔树脂为大孔树脂HP20、HZ816、AB-8或N200。

所述大孔树脂占所述发酵培养基的重量比例为0.2％-1.5％。

所述大孔树脂的粒径为60-100目。

所述发酵培养基的配方如下：甘油10-30g/L，植物油35-45g/L，玉米粉5-15g/L，黄豆粉20-35g/L，蛋白胨5-15g/L，卵磷脂5-15g/L，2-15g/L大孔树脂，碳酸钙0.8-1.2g/L。

优选地，所述发酵培养基的配方如下：甘油20g/L，植物油40g/L，玉米粉10g/L，黄豆粉28g/L，蛋白胨10g/L，卵磷脂10g/L，大孔树脂2g/L-15g/L，碳酸钙0.8g/L。