[发明专利]一种基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）配制金纳米结构溶液：将金纳米结构分散在磷酸盐缓冲溶液中，得到金纳米结构分散液A；

（2）配制高铁血红素溶液：将高铁血红素溶解在不同体积的磷酸盐缓冲溶液中，得到不同浓度的高铁血红素溶液B；

（3）制备标准样品：将金纳米结构分散液和高铁血红素溶液B混合搅拌，然后离心分离，移去上清液，将下层沉淀物分散到PBS中，取分散液晾干，得到含有不同浓度高铁血红素的标准样品；

（4）建立以枝状金纳米结构为拉曼基底，检测高铁血红素浓度的标准曲线：通过拉曼光谱仪检测步骤（3）所制备的标准样品的拉曼光谱，并记录其拉曼光谱特征峰信号I；最后将所得到的I与步骤（3）中标准样品的高铁血红素浓度的自然数对数值绘制成I-ln c标准曲线，采用线性回归法得到I-ln c线性回归方程，建立基于表面增强拉曼作用的高铁血红素的检测方法；

（5）检测红细胞中高铁血红素的浓度：将红细胞样品进行前处理，与步骤（1）中配制的金纳米结构溶液混合搅拌，然后离心分离，移去上清液，将下层沉淀物分散到PBS中，取分散液晾干，按照与步骤（4）相同的方法检测其拉曼光谱，根据拉曼光谱特征峰的强度I，由步骤（4）中得到的标准曲线，计算出待测样品中高铁血红素的含量。

2.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法，其特征在于，步骤（1）所述的金纳米结构为枝状结构，其粒径大小为50~60 nm。

3.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法，其特征在于，步骤（1）所配制的金纳米结构分散液A中，枝状金纳米粒子的浓度为50~150 μg/mL。

4.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法，其特征在于，步骤（2）所述高铁血红素溶解在不同体积的磷酸盐缓冲溶液中，得到不同浓度的高铁血红素溶液B，高铁血红素的摩尔浓度为15~600 µmol/L。

5.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法，其特征在于，步骤（3）所述混合搅拌为混合液磁力搅拌，时间为12-24 h。

6.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法，其特征在于，步骤（3）所述下层沉淀物分散到PBS中后，枝状金纳米粒子的浓度为100~300 µg/mL，所述不同浓度高铁血红素的标准样品的高铁血红素的浓度为10-400 µmol/L。

7.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法，其特征在于，步骤（4）所述拉曼光谱仪的激发波长为514 nm, 功率是10 mW, 积分时间是60ms。

8.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法，其特征在于，步骤（4）所述拉曼光谱特征峰信号I为选择1622 nm 波长处的拉曼峰作为定量分析特征峰。

9.一种权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的红细胞中高铁血红素的检测方法在检测人类红细胞中高铁血红素的浓度中的应用。