[发明专利]一种能特异性检测EV71病毒的适配体及试剂盒

说明书

本发明公开了一种可以特异性检测EV71病毒的适配体和试剂盒及其应用。适配体的序列如SEQ ID No.1所示。该适配体可以特异性的结合EV71 VP2蛋白，并与该蛋白具有很好的亲和能力。该适配体也可以制备成试剂盒用于检测EV71病毒，具有灵敏度高，制备简单，成本低廉，容易保存的优点。

技术领域

本发明属于检测领域，具体涉及一种可以特异性检测EV71病毒的适配体及试剂盒。

背景技术

肠道病毒71型(EV71)属于小RNA病毒科(Picornaradae)肠道病毒属(Enterovirus)成员，归属于人类肠道病毒A。1974年Schmidt等人首次报道从美国加利福尼亚暴发的表现为神经系统症状疾病(1969～1973年)的患者中分离到EV71，随后，世界上许多国家相继报道了EV71病毒在不同地区的流行情况，EV71病毒已在世界范围内引起多次暴发与流行，人们逐渐认识到EV71病毒是手足口病的主要病原。目前已知EV71的感染可以导致手足口病、疱疹性咽喉炎、无菌性脑膜炎等多种与神经系统相关的疾病。手足口病多发生于5岁以下儿童，表现口痛、厌食、低热、手、足、口腔等部位出现小疱疹或小溃疡，多数患儿一周左右自愈，少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症。个别重症患儿病情发展快，导致死亡。目前缺乏有效治疗药物。而抗病毒治疗一般在发病24小时到48小时前使用才是最佳的，因此，急需一些可以快速并灵敏检测EV71病毒的方法，从而可以早发现早治疗。

核酸适配体(Aptamer，又称适配体，适配子)是能高亲和性、高特异性的结合某种生物靶标的单链寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。核酸适配体是通过指数富集配体系统进化技术(Systematlc Evolutlon of Llgands by Exponentlal enrlchment，SELEX)从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的能够高度特异性结合靶标分子的单链DNA/RNA。已报道核酸适配体的靶标包括金属离子、有机小分子、多肽、蛋白质、细胞甚至组织等。核酸适配体的分子识别功能与抗体类似，具有与抗体分子相当甚至更强的靶标识别能力，但与抗体相比具有很多优良的特性，如分子量小，能批量生产，不易失活，无免疫原性、容易合成与标记、快速的穿透组织、良好的代谢动力学、不同批次之间产品不会存在差异和具有很好化学稳定性，在生物检测、疾病诊断治疗等领域具有重要的应用前景。

目前EV71的检测方法包括病毒的分离培养法、逆转录聚合酶链反应、EV71中和抗体测定法、EV71-IgM胶体金免疫层析法、EV71抗体酶联免疫吸附法、补体结合试验等。但这些技术均有耗时长，灵敏度不高，成本高昂等缺点。因此，急需一种灵敏度高，时间短，成本低廉的检测方法。而适配体则是解决上述问题的一种方法。中国专利号CN201110067159(一种检测手足口病病原的纳米探针芯片及其应用方法)公开了一个与EV71VP1区结合的适配体，但其也仅说明能够与EV71进行结合，并未深入研究其结合率以及灵敏性和特异性。

因此，开发一种灵敏性高，稳定性好的EV71适配体的需求是非常迫切的，并且现有技术中还并未有针对EV71VP2的适配体。

发明内容

本发明的目的是提供一种可以特异性检测EV71病毒的适配体及试剂盒。其具有灵敏度高，制备简单，成本低廉，容易保存的优点。

本发明提供的核酸适配体，是如序列表的序列1所示的单链DNA(SEQ ID No.1)；

所述核酸适配体与EV71病毒VP2蛋白具有较好的亲和能力。

还可将所述核酸适配体进行修饰或改造，得到所述核酸适配体的衍生物。

所述核酸适配体的衍生物可为如下任意一种：

a)将所述核酸适配体的骨架改造为硫代磷酸酯骨架，得到的与所述核酸适配体具有相同功能的核酸适配体的衍生物；

b)将核酸适配体改造为肽核酸，得到的与所述核酸适配体具有相同功能的核酸适配体的衍生物；