[发明专利]定量检测犬C反应蛋白的免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种定量检测犬C反应蛋白的免疫层析试纸条，所述试纸条由样品垫、包被膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上构成，其特征在于，所述包被膜包括标记区、检测区和质控区，所述标记区包被有荧光胶乳微粒标记的犬CRP单克隆抗体和羊抗鸡IgY抗体，且犬CRP单克隆抗体、羊抗鸡IgY抗体被标记于同一个荧光胶乳微粒上；所述检测区包被有与所述犬CRP单克隆抗体处于不同表位的另一种犬CRP单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的定量检测犬C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述标记区是将标记溶液喷在所述包被膜上制备得到，该标记溶液的制备包括如下步骤：

(1)活化荧光胶乳微粒，制备活化荧光胶乳微粒的溶液；

(2)向所述活化荧光胶乳微粒的溶液中加入羊抗鸡IgY抗体，室温混合；

(3)再向步骤(2)所得混合物中加入犬CRP单克隆抗体，室温混合；

(4)将步骤(3)所得混合物离心，溶解所得沉淀，获得标记溶液。

3.根据权利要求2所述的定量检测犬C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，步骤(1)中，所述活化荧光胶乳微粒的溶液的浓度为800～1200μg/100μL；

步骤(2)中，所述羊抗鸡IgY抗体的加入量为：每100μL所述活化荧光胶乳微粒的溶液中加入5～20μg，加入羊抗鸡IgY抗体后室温混合的时间为8～12min；

步骤(3)中，所述犬CRP单克隆抗体的加入量为：每100μL所述活化荧光胶乳微粒的溶液中加入20～40μg；加入犬CRP单克隆抗体后室温混合的时间为1.5～3小时；

步骤(4)中，所得沉淀用PBS-TBN溶解，调节所得溶液的体积与活化荧光胶乳微粒的溶液体积相等，获得标记溶液；

所述标记溶液的喷用量为0.012～0.024μL/cm²。

4.根据权利要求1至3任一项所述的定量检测犬C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光胶乳微粒的直径为0.1～1μm。

5.根据权利要求1至3任一项所述的定量检测犬C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光胶乳微粒受激发后发射的波长为180～800nm。

6.根据权利要求1至3任一项所述的定量检测犬C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述检测区是将另一犬CRP单克隆抗体溶液喷在所述包被膜上制备而成，该另一犬CRP单克隆抗体溶液浓度为0.5～1.0mg/mL，用量为20μL/(27～35)cm²。

7.根据权利要求1至3任一项所述的定量检测犬C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述质控区是将鸡IgY抗体溶液喷在所述包被膜上制备而成。

8.根据权利要求7所述的定量检测犬C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述鸡IgY抗体溶液的浓度为0.5～1.0mg/mL，该溶液的用量为20μL/(27～35)cm²。

9.根据权利要求1至8任一项所述的定量检测犬C反应蛋白的免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、荧光胶乳微粒共价活化，并制备成活化荧光胶乳微粒的溶液；

B、荧光胶乳微粒标记抗体的制备：向上述活化荧光胶乳微粒的溶液中先加入羊抗鸡IgY抗体室温混匀、再加入犬CRP单克隆抗体室温混匀，获得混合物中含有荧光胶乳微粒标记的犬CRP单克隆抗体和羊抗鸡IgY抗体，且犬CRP单克隆抗体、羊抗鸡IgY抗体被标记于同一个荧光胶乳微粒上，离心所得混合物并将所得沉淀制备成溶液，得到标记溶液；

C、包被膜的制备：将所得标记溶液喷到标包被膜制备标记区；将另一种犬CRP单克隆抗体溶液、鸡IgY抗体溶液分别喷到包被膜上制备检测区、质控区；

D、在底板上顺次相互搭接地粘贴样品垫、所述包被膜和吸水纸，切割成适当宽度，获得试纸条。

10.根据权利要求9所述的定量检测犬C反应蛋白的免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述标记溶液的喷用量为0.012～0.024μL/cm²；

所述活化荧光胶乳微粒的溶液的浓度为800～1200μg/100μL；所述羊抗鸡IgY抗体的加入量为：每100μL所述活化荧光胶乳微粒的溶液中加入5～20μg，加入羊抗鸡IgY抗体后室温混合8～12min；

所述犬CRP单克隆抗体的加入量为：每100μL所述活化荧光胶乳微粒的溶液中加入20～40μg，加入犬CRP单克隆抗体后室温混合1.5～3小时；

离心所得混合物并将所得沉淀制备成溶液包括：离心所得混合物离心，所得沉淀用PBS-TBN溶解，调节所得溶液的体积与活化荧光胶乳微粒的溶液体积相等，获得标记溶液。