[发明专利]肿瘤新抗原的筛选方法和试剂盒在审
申请号: | 201810595385.9 | 申请日: | 2018-06-11 |
公开(公告)号: | CN108865993A | 公开(公告)日: | 2018-11-23 |
发明(设计)人: | 范晶;黄卫人;蔡志明 | 申请(专利权)人: | 深圳市第二人民医院 |
主分类号: | C12N5/078 | 分类号: | C12N5/078;G01N21/64 |
代理公司: | 深圳中一专利商标事务所 44237 | 代理人: | 官建红 |
地址: | 518000 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 氨基酸序列 抗原 肿瘤 细胞培养 筛选 荧光信号 试剂盒 样本 荧光报告基团 荧光淬灭基团 高通量检测 独立区域 发光区域 候选抗原 突变位点 修饰 检测 | ||
1.一种肿瘤新抗原的筛选方法,其特征在于,包括如下步骤:
获取氨基酸序列集,所述氨基酸序列集包括与样本的HLA基因型和候选抗原突变位点所在的序列对应的至少一种氨基酸序列;
用荧光报告基团和荧光淬灭基团将所述氨基酸序列进行修饰,然后固定在载体上;其中,每种所述氨基酸序列在载体上具有独立区域;
获取所述样本的PBMC,将固定有所述氨基酸序列的载体置于所述PBMC中进行细胞培养;
待所述细胞培养结束后,检测所述载体上的荧光信号,根据所述荧光信号筛选出肿瘤新抗原:所述载体上的阳性发光区域对应的氨基酸序列即为所述肿瘤新抗原。
2.如权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,获取氨基酸序列集的步骤包括:对样本的肿瘤组织和/或瘤旁组织进行核酸测序,然后利用生物信息学分析得到所述氨基酸序列。
3.如权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所示荧光报告基团修饰在所述氨基酸序列的一端或一侧,所述荧光淬灭基团距离所述荧光报告基团5-20个氨基酸,且所述氨基酸序列的另一端固定在所述载体上。
4.如权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述载体表面修饰有巯基、马来酰亚胺基、氨基、羧基中的至少一种化学基团,所述载体通过所述化学基团与所述氨基酸序列连接固定。
5.如权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述荧光报告基团选自荧光素、荧光染料和量子点中的任意一种;和/或所述荧光淬灭基团选自TAMRA、BHQ、Dabcyl和CPQ-2中的任意一种。
6.如权利要求1-5任一项所述的筛选方法,其特征在于,所述载体为二维阵列芯片,所述二维阵列芯片的表面设置有多个凹槽,每个所述凹槽内用于连接固定一种所述氨基酸序列。
7.一种用于筛选肿瘤新抗原的试剂盒,其特征在于,包括载体、荧光报告基团和荧光淬灭基团;所述载体的表面设置有多个凹槽,所述凹槽内修饰有巯基、马来酰亚胺基、氨基、羧基中的至少一种化学基团,每个所述凹槽内通过所述化学基团与一种氨基酸序列连接固定,所述荧光报告基团和所述荧光淬灭基团用于修饰所述氨基酸序列;其中,所述氨基酸序列为与样本的HLA基因型和候选抗原突变位点所在的序列对应的氨基酸序列。
8.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所示荧光报告基团修饰所述氨基酸序列的一端或一侧,所述荧光淬灭基团距离所述荧光报告基团5-20个氨基酸,且所述载体通过所述化学基团与所述氨基酸序列的另一端连接以固定所述氨基酸序列。
9.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述荧光报告基团选自荧光素、荧光染料和量子点中的任意一种;和/或所述荧光淬灭基团选自TAMRA、BHQ、Dabcyl和CPQ-2中的任意一种。
10.如权利要求7-9任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述载体为二维阵列芯片。
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