[发明专利]缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶(MiDGAT2C)基因序列及功能鉴定

说明书

本发明涉及缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶(MiDGAT2C)基因序列(如SEQ ID NO:7所示)及其应用。其特点表现在：MiDGAT2C不同于本课题组已克隆到的另外两个DGAT2基因。将该基因转化至酵母的TAG合成缺陷株H1246中表达，发现该基因的转入确实能使该酵母缺陷株H1246恢复合成TAG，证明了该基因编码蛋白具有合成TAG的功能。并发现MiDGAT2C对花生四烯酸‑CoA没有催化活性，但能将亚油酸‑、γ‑亚麻酸‑或α‑亚麻酸‑CoA的酰基转至DAG甘油骨架的sn‑3位以产生TAG，且能力相近。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体地说，涉及缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶(MiDGAT2C)基因序列及功能鉴定。

背景技术

随着石油、煤、天然气等有限自然资源的不断耗尽，人类对可再生能源的需求日益强烈。科学家们急需寻求一种占地资源少、产业性能强、对环境污染可控的新型可再生能源。生物柴油，特别是微藻生物柴油以其得天独厚的优势越来越被科学家们所青睐。生物柴油的主要原料为三酰甘油(TAG)，它以油滴的方式存在于真核生物的细胞中。本发明有关的微藻是缺刻缘绿藻(Myrmecia incisa Reisigl H4301)，它是一种淡水单细胞微藻，隶属绿藻门(Chlorophyta)。该藻能大量积累TAG，特别在缺氮培养条件下，是潜在的微藻生物柴油藻种。

TAG的合成有三条途径，其中Kennedy途径是唯一一条依赖于酰基-辅酶A(CoA)的途径，也是TAG合成的主要途径，该途径通过各种酰基转移酶依次把酰基-CoA的酰基链转移到甘油骨架的sn-1、sn-2和sn-3位置。酰基-CoA:二酰基甘油酰基转移酶(DGAT，EC2.3.1.20)作用于TAG生物合成的最后一步。它以酰基-CoA为底物，催化并使sn-1，2-二酰基甘油(DAG)甘油骨架的sn-3位酰化，从而形成TAG。同时，它也是一种限速酶，它有可能被用来增加含油植物包含微藻的含油量。到目前为止，发现DGAT有三个家族，分别为DGAT1、DGAT2和DGAT3。

专利号为ZL201210477507.7的中国专利公开了一种缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶(MiDGAT2A)，专利号为ZL201310668330.3的中国专利公开了一种缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶(MiDGAT2B)，专利号为ZL201510646709.3的中国专利公开了一种缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶1(MiDGAT1)。但是，本发明的缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶(MiDGAT2C)还未见报道。

发明内容

本发明的第一个目的是，针对现有技术中的不足，提供一种DNA序列。

本发明的第二个目的是，提供一种DNA序列的应用。

本发明的第三个目的是，提供一种蛋白。

本发明的第四个目的是，提供一种蛋白的应用。

本发明的第五个目的是，提供一种重组表达载体。

本发明的第六个目的是，提供一种重组表达载体的应用。

本发明的第七个目的是，提供一种cDNA序列。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：一种分离的DNA序列，其特征在于，所述的DNA序列为：

a)如SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列；或

b)与a)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：所述的DNA序列在生产三酰甘油中的应用。

将亚油酸-、γ-亚麻酸-或α-亚麻酸-CoA的酰基转至DAG甘油骨架的sn-3位以产生三酰甘油。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：上述DNA序列编码的蛋白。