[发明专利]超嗜热脂肪酶LipL及其相关生物材料与应用

说明书

本发明公开了超嗜热脂肪酶LipL及其相关生物材料与应用。该超嗜热脂肪酶LipL为A1)‑A3)中的任一蛋白质：A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质；A2)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第53‑675位的蛋白质；A3)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第54‑675位的蛋白质。该超嗜热脂肪酶的酶反应的最适温度为70℃，酶反应的最适pH为9.5，在37℃、pH值为9‑10条件下的脂肪酶酶活是在37℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活的80％以上，在70‑90℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活是在70℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活的97％以上。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中超嗜热脂肪酶LipL及其相关生物材料与应用。

背景技术

脂肪酶(EC 3.1.1.3)被认为是最重要的商业酶之一，在快速增长的生物技术领域引起了极大的关注。脂肪酶可以在油和水的界面催化三酰基甘油水解，释放二酰基甘油酯，长链脂肪酸(10个碳)和甘油。在水解过程中，脂肪酶与底物酰基结合形成脂肪酶-酰基复合物，然后将酰基转移到水分子的羟基基团上从而实现水解。在非水溶条件下，脂肪酶可以将羧酸的酰基转移到亲核试剂。

微生物来源的脂肪酶广泛用于各领域，包括工业、食品、饲料和医疗领域。与传统化学催化剂相比，脂肪酶使用领域更为广泛且可重复使用，对环境友好等优点而被重视，但脂肪酶大都对极端温度以及苛刻反应pH比较敏感，必须根据特定的工业环境选择具有特定酶学性质的脂肪酶。根据最适反应温度可以将脂肪酶分为低温、中温、嗜热和超嗜热酶，目前大多数工业生产都是在中高温碱性条件下进行的(45℃以上，pH7以上)。通常在实际应用中使用的化学类催化剂不具备生物学活性，这是酶制剂在工业反应中的一大优势，而在苛刻的工业条件下稳定存在并且持续发挥着催化活性的脂肪酶就显得凤毛麟角了，尤其是超过70℃的最适温度的超嗜热脂肪酶几乎难以找到。许多脂肪酶参与的工业催化反应过程都要求较高的反应温度和较好的热稳定性，如纸架脱脂脱墨、皮毛脱脂以及饲料生产，因此超嗜热脂肪酶在工业领域具有着重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题是提供超嗜热脂肪酶。

本发明所提供的超嗜热脂肪酶是A1)-A5)中的任一蛋白质：

A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质；

A2)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第53-675位的蛋白质；

A3)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第54-675位的蛋白质；

A4)在A2)或A3)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白；

A5)将A2)或A3)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有超嗜热脂肪酶活性的蛋白质。

上述超嗜热脂肪酶中，A1)的蛋白质名称为RTLipL-his，A2)的蛋白质名称为RTLipL，A3)的蛋白质名称为TLipL。TLipL是来源于Trichoderma lentiforme ACCC 30425的成熟的蛋白质。RTLipL是在TLipL的氨基末端添加甲硫氨酸残基保持TLipL的其它氨基酸残基不变得到的重组蛋白质。RTLipL-his是在TLipL的氨基末端添加SEQ ID No.2的第1-53位氨基酸残基，在TLipL的羧基末端添加SEQ ID No.2的第676-683位氨基酸残基，保持TLipL的其它氨基酸残基不变得到的重组蛋白质。

上述超嗜热脂肪酶中，SEQ ID No.2由683个氨基酸残基组成。

上述超嗜热脂肪酶中，蛋白标签是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化等。