[发明专利]一种改进的2-酮基-L-古龙酸发酵生产工艺

权利要求书

1.一种改进的2-酮基-L-古龙酸发酵生产工艺，其特征在于它是按如下步骤：

第一步、单菌发酵

通过一步菌种将D-山梨醇转化成L-山梨糖；

第二步、混合菌发酵

将部分第一步发酵的产物山梨糖醪液直接合入到二步培养基中，至二步培养基的初始山梨糖浓度达2.0～9.0％，接种二步菌种，培养，当发酵液中的残留山梨糖浓度降至1.0～5.0％时，开始进行剩余山梨糖醪液的连续补加，并在此后的发酵过程中，通过补加剩余山梨糖醪液维持发酵液的残留山梨糖浓度在0.5～4.0％，发酵终止前停止补加，至发酵液的残留山梨糖浓度≤0.5mg/mL时终止发酵，在整个混合菌发酵期间控制温度在28～33℃，使用15～25％的氢氧化钠溶液调节发酵液的pH值：

(1)、初始阶段维持发酵液的pH值为7.5～8.5；

(2)、当发酵液中2-酮基-L-古龙酸的含量达5～15mg/ml时，将发酵液的pH值下调至6.5～7.0；

(3)、当发酵液中2-酮基-L-古龙酸的含量达50～90mg/ml后，将发酵液的pH值调整为7.0～7.5，至终点，生产2-酮基-L-古龙酸的。

2.根据权利要求1所述的改进的2-酮基-L-古龙酸发酵生产工艺，其特征在于：

第二步、混合菌发酵

二步培养基配方(％)：玉米浆1.5、尿素0.1、磷酸二氢钾0.05、硫酸镁0.02，pH6.5～8.2。

3.根据权利要求1或2所述的改进的2-酮基-L-古龙酸发酵生产工艺，其特征在于：

第二步、混合菌发酵

将部分第一步发酵的产物山梨糖醪液直接合入到二步培养基中，至二步培养基的初始山梨糖浓度达9.0％，接种二步菌种，培养，当发酵液中的残留山梨糖浓度降至3.5～5.0％时，开始进行剩余山梨糖醪液的连续补加，并在此后的发酵过程中，通过补加剩余山梨糖醪液维持发酵液的残留山梨糖浓度在2.0～4.0％，发酵终止前7～15小时停止补加，至发酵液的残留山梨糖浓度≤0.5mg/mL时终止发酵，在整个混合菌发酵期间控制温度在28～33℃，使用15～25％的氢氧化钠溶液调节发酵液的pH值：

(1)、初始阶段维持发酵液的pH值为7.6～8.2；

(2)、当发酵液中2-酮基-L-古龙酸的含量达5～15mg/ml时，将发酵液的pH值下调至6.5～7.0；

(3)、当发酵液中2-酮基-L-古龙酸的含量达50～90mg/ml后，将发酵液的pH值调整为7.0～7.5，至终点，生产2-酮基-L-古龙酸的。

4.根据权利要求1或2所述的改进的2-酮基-L-古龙酸发酵生产工艺，其特征在于：

第二步、混合菌发酵

将部分第一步发酵的产物山梨糖醪液直接合入到二步培养基中，至二步培养基的初始山梨糖浓度达2.5％，接种二步菌种，培养，当发酵液中的残留山梨糖浓度降至1.0～2.0％时，开始进行剩余山梨糖醪液的连续补加，并在此后的发酵过程中，通过补加剩余山梨糖醪液维持发酵液的残留山梨糖浓度在0.5～2.0％，发酵终止前3～8小时停止补加，至发酵液的残留山梨糖浓度≤0.5mg/mL时终止发酵，在整个混合菌发酵期间控制温度在28～33℃，使用15～25％的氢氧化钠溶液调节发酵液的pH值：

(1)、初始阶段维持发酵液的pH值为7.7～8.2；

(2)、当发酵液中2-酮基-L-古龙酸的含量达5～15mg/ml时，将发酵液的pH值下调至6.5～7.0；

(3)、当发酵液中2-酮基-L-古龙酸的含量达50～90mg/ml后，将发酵液的pH值调整为7.0～7.5，至终点，生产2-酮基-L-古龙酸的。