[发明专利]一种用于培养人脂肪干细胞的培养基

说明书

本发明公开了一种用于培养人脂肪干细胞的培养基，该培养基由如下组分组成：DMEM基础培养基、人血清白蛋白、转铁蛋白、还原型谷胱甘肽、亚油酸、青霉素，链霉素，L‑谷氨酰胺，碱性成纤维细胞生长因子，维生素C和植物提取多肽组成。本发明的培养基具有培养速度，细胞保持较好的完整性和活性。该培养基能够用于大规模的细胞培养，成本低廉方便配制。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种人脂肪干细胞的培养基。

背景技术

脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells，ADSCs)是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞，具有可迅速扩增、不易衰老等一般干细胞的特点。人脂肪干细胞即人体脂肪间充质干细胞是目前广泛应用于组织工程及再生医学领域的一种成体干细胞与骨髓间充质干细胞一样具有多向分化潜能。ADSCs呈成纤维细胞样生长，胞浆和核仁丰富，呈平行或漩涡样排列。细胞周期分析显示G0/G1期的细胞占69％，S期占24％，G2/M期占8％。在胎牛血清的存在条件下传代培养2-3天细胞增殖1倍。多次传代(10-20代)后，细胞增殖速度无明显减慢，在传代6次后细胞群体中出现衰老细胞，第15代细胞群体中衰老细胞约占15％。

由于人脂肪间充质干细胞分离培养周期较长，原代细胞铺满的时间约2周以上，达到一定的数量需要3周左右。人脂肪间充质干细胞体外长期培养传代容易发生自发分化，失去其多向分化的潜能。所以为保证实验的连续性，必须随时提供大量的实验或组织工程用的种子细胞。因此，对于细胞培养基的需求非常强烈。

目前常用的ADSCs培养是利用饲养层细胞与采用含10％胎牛血清的培养基进行培养。这种培养干细胞方法的缺点是方法复杂，提取的干细胞数量少，纯度不高，继代增殖缓慢，更要紧的是使用饲养层细胞和动物血清容易导致干细胞污染，特别是动物血清内潜在动物源性内毒素或病毒将对人体健康构成极大地风险，这样培养出的干细胞不适于直接应用于临床。因此，开发一种合适的有效的培养基变得迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的是提供一种人脂肪干细胞培养基，克服使用血清制备细胞培养基的缺点和风险。大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵,是构成动物细胞培养生产成本的主要部分之一。

本发明提供一种特别适合于人脂肪干细胞培养基，该培养基由如下组分组成：DMEM基础培养基、人血清白蛋白、转铁蛋白、还原型谷胱甘肽、亚油酸、青霉素，链霉素，L-谷氨酰胺，碱性成纤维细胞生长因子，维生素C和植物提取多肽组成。

其中，各组分的具体用量分别为青霉素100IU/ml，链霉素100μg/ml，L-谷氨酰胺2mmol/L，碱性成纤维细胞生长因子l0ng/ml，维生素C 50μg/ml，人血清白蛋白13μg/mL，转铁蛋白6μg/mL、还原型谷胱甘肽浓度为10μg/mL、亚油酸浓度为5μg/mL，植物提取多肽30μg/ml。

本发明另外提供一种培养人脂肪干细胞的方法，包括将人脂肪干细胞加入到所述的人脂肪干细胞培养基进行培养的步骤。

本发明另外提供一种获得植物多肽，该多肽从天然植物川西喜冬草中提取，川西喜冬草常绿小草本状半灌木，其叶片稍肥厚有光泽，申请人推测其就有较强的耐逆和抗旱抗氧化的功效。申请人通过分离该植物叶片通过制备蛋白库功能分析发现，该植物提取的多肽具有稳定人脂肪干细胞，促进干细胞生长，保持干细胞正常生长状态的功效。