[发明专利]一种获得海藻糖合成酶突变体的方法及其应用在审
申请号: | 201810599106.6 | 申请日: | 2018-06-12 |
公开(公告)号: | CN108588062A | 公开(公告)日: | 2018-09-28 |
发明(设计)人: | 李晓明;韦航;李丛;梁树华;谢能中 | 申请(专利权)人: | 南宁中诺生物工程有限责任公司 |
主分类号: | C12N9/90 | 分类号: | C12N9/90;C12P19/24;C12P19/12 |
代理公司: | 广西南宁公平知识产权代理有限公司 45104 | 代理人: | 王素娥 |
地址: | 530003 广西壮族*** | 国省代码: | 广西;45 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 海藻糖合成酶 突变体酶 突变体 葡萄糖 海藻糖 组氨酸 弯曲高温单孢菌 谷氨酸 麦芽糖溶液 谷氨酰胺 活性位点 快速检测 快速筛选 天冬酰胺 转化效率 精氨酸 氨基酸 得率 底物 制备 突变 生物工程 应用 饱和 筛选 生产 | ||
1.一种来源于弯曲高温单孢菌(Thermomonospora curvata)的海藻糖合成酶的突变体,其特征在于,第286位的组氨酸替换为谷氨酰胺,或第286位的组氨酸替换为天冬酰胺,或第339位的谷氨酸替换为精氨酸;
来源于弯曲高温单孢菌(Thermomonospora curvata)的海藻糖合成酶的序列如SEQ IDNO.1所示。
2.一种获得海藻糖合成酶突变体的方法,其特征在于,对来源于弯曲高温单孢菌(Thermomonospora curvata)的海藻糖合成酶活性位点附近的氨基酸进行饱和突变,以含有葡萄糖的麦芽糖溶液为底物,快速筛选海藻糖得率高的突变体酶;
所述的海藻糖合成酶活性位点附近的氨基酸包括第280位的谷氨酸,第286位的组氨酸,第335位的甲硫氨酸和第339位的谷氨酸。
3.一种海藻糖合成酶的生产方法,其特征在于,将编码权利要求1所述的海藻糖合成酶突变体基因转入宿主细胞,然后利用该宿主细胞进行常规发酵生产海藻糖合成酶;
所述的宿主细胞为常规基因工程表达宿主细胞,包括大肠杆菌细胞和枯草芽孢杆菌细胞。
4.一种海藻糖合成酶突变体的应用,其特征在于,以麦芽糖浆或淀粉浆为原料,通过常规酶法转化生产海藻糖的方法,用权利要求3海藻糖合成酶的生产方法得到的海藻糖合成酶制造海藻糖。
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