[发明专利]一种用于检测宫颈癌PAX1基因甲基化的试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于检测宫颈癌PAX1基因甲基化的试剂盒，其内设有裂解试剂；裂解试剂包括：裂解修饰液，其包括亚硫酸氢铵、亚硫酸铵、盐酸胍、氢氧化钠和对苯二酚；结合增强剂，其包括异丙醇和氯化钠。本发明可将核酸的提取和扩增检测在全封闭环境下一体化整合，高效简便，结果准确。

技术领域

本发明涉及一种用于检测宫颈癌PAX1基因甲基化的试剂盒。

背景技术

以PCR技术为基础的核酸诊断分析方法是分子诊断中的核心技术。将核酸自动提取过程与PCR扩增检测过程相互集成，构建一体化的核酸提取与扩增检测系统，对于进一步提高核酸诊断分析效率，实现整个核酸诊断分析过程的自动化具有重要的现实意义。

中国专利申请201610266982.8公开了一种基于硼掺杂石墨烯量子点的宫颈癌细胞检测试剂盒，属于生物检测领域。所述宫颈癌细胞检测试剂盒包括试剂A、B和C，试剂A为硼掺杂石墨烯量子点溶液，试剂B为硝酸铈溶液，试剂C为腺苷三磷酸溶液。

中国专利申请201510608996.9公开了一种宫颈癌预后检测方法，依次包括以下步骤：组织芯片的处理、结果评判、判定等步骤，该方法通过免疫组化和定量PCR方法检查SETD4表达水平，发现相对正常组织，宫颈炎症组织SETD4轻度升高，肿瘤组织中显著升高，SETD4的表达水平在可用来预测宫颈癌预后，并可作为预测宫颈癌治疗效果的预后指标。

中国专利申请201710064368.8公开了一种宫颈癌的筛查试剂盒，它包括任选的用于检测血液中SPARCL1表达水平的试剂。本发明还公开了检测血液中SPARCL1表达水平的试剂在制备宫颈癌筛查用试剂中的用途。

上述技术方案的缺陷在于：

检测过程繁琐，多个环节需要增加手工操作；核酸提取、核酸亚硫酸转化、核酸甲基化检测分为三部分操作，不能同时进行，步骤繁多，操作复杂；核酸提取和核酸亚硫酸转化不能和核酸甲基化检测试剂一体化，检测过程开放，容易引起外部环境与检测试剂交叉污染；检测时间长。

因此，如何提供一种核酸提取、亚硫酸转化和甲基化检测一体化进行、操作快捷的试剂盒成为了业界需要解决的问题。

发明内容

针对现有技术的缺点，本发明的目的是提供一种用于检测宫颈癌PAX1基因甲基化的试剂盒，其结构简单，高效准确，核酸提取、亚硫酸转化和甲基化检测一体化进行，检测过程封闭、可有效避免外部环境与检测试剂交叉污染。

为了实现上述目的，本发明提供了一种用于检测宫颈癌PAX1基因甲基化的试剂盒，试剂盒内设有裂解试剂；裂解试剂包括：

裂解修饰液，裂解修饰液包括亚硫酸氢铵、亚硫酸铵、盐酸胍、氢氧化钠和对苯二酚；

结合增强剂，结合增强剂包括异丙醇和氯化钠。

本发明中，各试剂的溶剂均为水。

裂解修饰液配方为：

亚硫酸氢铵3mol/L、亚硫酸铵2mol/L、盐酸胍2.5mol/L、

氢氧化钠0.5mol/L、对苯二酚0.5mmol/L。

结合增强剂配方为：异丙醇70％(体积分数)、氯化钠0.3mol/L。

样本在裂解修饰液中会被裂解，释放出核酸；核酸会被转化修饰，未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影响。

本发明解决了核酸提取和核酸扩增检测不能一体化、核酸提取和核酸扩增检测过程操作繁杂的技术问题，高效简便，结果准确。

根据本发明另一具体实施方式，试剂盒包括：