[发明专利]一种用于检测HBV-pgRNA的试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于检测HBV‑pgRNA的试剂盒，其包括扩增试剂；扩增试剂原料包括：HBV‑pgRNA引物探针序列；保护剂，其包括海藻糖、蔗糖和棉子糖；灵敏度增强剂，其包括苏氨酸、牛血清白蛋白和TrisX‑100；扩增酶系，其包括重组酶、辅助酶、单键结合蛋白、聚合酶和内切酶；dNTPS。本发明可将核酸的提取和扩增检测在全封闭环境下一体化整合，高效简便，结果准确。

技术领域

本发明涉及一种用于检测HBV-pgRNA的试剂盒。

背景技术

以RPA恒温扩增技术为核心，将核酸自动提取过程与RPA恒温扩增检 测过程，构建成为一体化的核酸提取与扩增检测系统，对于进一步提高核 酸诊断分析效率，实现整个核酸诊断分析过程的自动化具有重要的现实意 义。

中国专利申请201611064389.1公开了一种HBV病毒的检测方法,包括 如下步骤：从血清中分离得到核酸提取液，获取待测样本；采用荧光定量 PCR仪检测反应结果，荧光信号收集时设定为Taqman荧光探针PgRNA-FP 5’端荧光基团对应的荧光素，在60℃收集荧光信号；对结果分析。

中国专利申请201510900726.5公开了一种用于检测HBV核酸的引物 组、探针、试剂盒及检测样本中HBV核酸的方法，其涉及乙型肝炎病毒核 酸的检测。

中国专利201310689663.4公开了一种应用于生物医学临床诊断领域中 的乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒，试剂盒包括磁珠法核酸提取 试剂盒和HBV核酸扩增试剂盒，其中磁珠法核酸提取试剂盒包括裂解结合 液、漂洗液、洗脱液、磁珠液；HBV核酸扩增试剂盒包括HBV-PCR反应液、 酶混合液、HBV-内标、HBV定量参考品1-4、阴性质控品、临界阳性质控 品、强阳性质控品。

上述技术方案的缺陷在于：

检测过程繁琐，多个环节需要增加手工操作；检测时间长；扩增试剂 效率不高、灵敏度低、保存条件苛刻；检测过程开放，容易引起外部环境 与检测试剂交叉污染。

因此，如何提供一种检测过程简便，检测时间短；扩增试剂高效灵敏、 便于保存；检测过程封闭、可有效避免外部环境与检测试剂交叉污染的试 剂盒成为了业界需要解决的问题。

发明内容

针对现有技术的缺点，本发明的目的是提供一种用于检测 HBV-pgRNA的试剂盒，其检测过程简便，检测时间短；扩增试剂高效灵敏、 便于保存；检测过程封闭、可有效避免外部环境与检测试剂交叉污染。

为了实现上述目的，本发明提供了一种用于检测HBV-pgRNA的试剂 盒，试剂盒包括扩增试剂；扩增试剂原料包括：

HBV-pgRNA引物探针序列；

保护剂，保护剂包括海藻糖、蔗糖和棉子糖；

灵敏度增强剂，灵敏度增强剂包括苏氨酸、牛血清白蛋白和TrisX-100；

扩增酶系，扩增酶系包括重组酶、辅助酶、单键结合蛋白、聚合酶和 内切酶；

dNTPS。

本发明中，扩增试剂原料各组分混合在一起，呈液态；经过冻干工艺 处理后得到干粉状的扩增试剂。

本发明中，HBV-pgRNA引物探针序列包括：

引物组：

上游引物F1：5’-TAGACCACCAAATGCCCCTAT-3’

下游引物R1：5’-GTGTCGTGTGTTACGGTGTGAGAA-3’,