[发明专利]一种用于血液EGFR C797S突变检测的引物探针组合物和试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于血液EGFR C797S突变检测的引物探针组合物和试剂盒。本发明的引物探针组合物和试剂盒包括上游引物、下游引物、目标探针和阻滞序列；其中，上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示，目标探针的序列如SEQ ID NO:3所示，阻滞序列如SEQ ID NO:4所示。本发明的引物探针组合物和试剂盒用于EGFR基因C797S突变的检测，检测速度快，灵敏度高，特异性强。

技术领域

本发明属于生物化学技术领域，具体的说，涉及一种用于血液EGFR C797S突变检测的引物探针组合物和试剂盒。

背景技术

肺癌是全世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占全部肺癌的80％左右。肺癌的治疗提倡个体化治疗模式。是基于肺癌患者的驱动基因表达状态，即根据肺癌患者是否存在驱动基因的个体化治疗，仅基于病理学治疗模式已经无法满足现代肺癌的治疗。其中，EGFR突变是重要的癌症驱动因子，我国肺癌患者EGFR突变率达30％以上。不吸烟、女性、腺癌患者中比较多见，约有50％左右的突变率。

EGFR广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面，是上皮生长因子(EGF)细胞增殖和信号传导的受体。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相关信号通路中关键因子的活性或细胞定位异常，与肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关。目前，针对EGFR的靶向治疗已取得较大的进展，作用于EGFR激酶区域的酪氨酸激酶抑制剂(TKI)在临床上被广泛的应用在非小细胞肺癌EGFR突变患者的治疗上，并取得了较好的效果。易瑞沙、特罗凯、凯美纳等属于第一代的EGFR-TKI靶向药。但是，第一、二代靶向药物虽然疗效显著，但2/3的患者都会在使用药物1-2年出现抗药性。EGFR20外显子T790M突变被认为是第一代、第二代靶向药常见耐药突变。新一代的靶向药物如AZD9291，Rociletinib(Co-1686)均显示对T790M敏感。但是，在10个月左右，患者仍然会产生耐药性。目前已有研究表明C797S是这些第三代EGFR靶向药物的重要耐药原因之一。因此，对EGFR 20外显子C797S位点的检测意义重大。

研究显示，大部分(并非全部)晚期NSCLC患者的血液中存在循环游离DNA(cfDNA，cell free DNA)。cfDNA主要来源于凋亡或坏死的细胞，包括正常细胞和肿瘤细胞，如果来自肿瘤细胞称为循环肿瘤DNA(ctDNA)。但是血液游离DNA片段通常较短，在晚期癌症患者血液中浓度极低，平均约为17μg/L。因此，对检测敏感性的要求非常高。目前已有很多血液EGFR基因突变检测的方法的报道，如高分辨熔点曲线分析法(HRM)、变性高效液相色谱技术(DHPLC)、二代测序、数字PCR方法等。数字PCR在血浆EGFR基因突变检测上具有较高的灵敏度和特异度，但目前报道的该方法检测EGFR基因突变位点相对有限(19外显子缺失，21号外显子L858R突变以及20号外显子T790M突变)，仍处在摸索、累积经验阶段；其对操作人员和环境均有较高的要求。以二代测序技术(NGS)为代表的新技术拓展了基因突变检测的深度和广度，但其临床转化应用需要更多的数据积累。因此，目前急需一种灵敏性高，特异性强，简便易行的EGFR C797S突变检测的方法。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种用于血液EGFR C797S突变检测的引物探针组合物和试剂盒。本发明的引物探针组合物和试剂盒用于EGFR基因C797S突变的检测，检测速度快，灵敏度高，特异性强。

本发明的技术方案具体介绍如下。

本发明提供一种用于血液EGFR C797S突变检测的引物探针组合物，其包括上游引物、下游引物、目标探针和阻滞序列；其中，上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示，目标探针的序列如SEQ ID NO:3所示，阻滞序列如SEQ ID NO:4所示。