[发明专利]一种柳杉茎段愈伤组织诱导及植株再生培养方法有效
| 申请号： | 201810600276.1 | 申请日： | 2018-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN108812312B | 公开（公告）日： | 2019-09-27 |
| 发明（设计）人： | 徐进;董京;陈金慧;施季森 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) 32274 | 代理人： | 邱兴天 |
| 地址： | 210037 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 植株再生 愈伤组织诱导 组培苗茎段 愈伤组织 不定芽 外植体 茎段 组培 愈伤组织诱导培养基 再生植株培养 组织培养条件 不定芽诱导 分化培养基 技术支撑 有效解决 组织培养 不定根 组培苗 诱导 转入 生长 | ||
1.一种柳杉茎段愈伤组织诱导及植株再生培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)选取柳杉优良无性系组培苗的茎段为组织培养材料，将茎段的针叶剪除，取3～4cm长的茎段接入愈伤组织诱导培养基培养，使高度分化的茎段脱分化为愈伤组织，其中，愈伤组织诱导培养基配方为：改良DCR+2，4-D 0.5-2.0mg/L+6-BA 0.1-1.5mg/L+水解酪蛋白400-600mg/L+L-谷氨酰胺400-600mg/L+30-40g/L蔗糖；
2)将愈伤组织接入继代培养基进行继代增殖培养；柳杉茎段诱导愈伤组织的继代增殖培养基配方为改良DCR+2，4-D 0.5-2.0mg/L+6-BA 0.1-1.5mg/L+25-35g/L蔗糖；
3)将柳杉茎段诱导的愈伤组织转入不定芽诱导培养基，诱导培养产生不定芽；不定芽诱导培养基为：改良DCR+2，4-D 1.0mg/L+6-BA 1.2mg/L；
4)待不定芽长到2-3cm时，从愈伤组织上切下，将不定芽转入生长培养基进行不定芽与不定根的生长培养，生长培养基为DCR基本培养基。
2.根据权利要求1所述的柳杉茎段愈伤组织诱导及植株再生培养方法，其特征在于：步骤1)中，愈伤组织诱导培养基配方为：改良DCR+2，4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+水解酪蛋白500mg/L+L-谷氨酰胺400mg/L+40g/L蔗糖。
3.根据权利要求1所述的柳杉茎段愈伤组织诱导及植株再生培养方法，其特征在于：步骤1)中，柳杉优良无性系为011号无性系，培养条件为25℃，暗培养。
4.根据权利要求1所述的柳杉茎段愈伤组织诱导及植株再生培养方法，其特征在于：步骤2)中，继代增殖培养基配方为：改良DCR+2，4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+30g/L蔗糖。
5.根据权利要求1所述的柳杉茎段愈伤组织诱导及植株再生培养方法，其特征在于：步骤2)中，愈伤组织在改良DCR+0.5mg/L 6-BA+1.0mg/L 2，4-D、改良DCR+0.5mg/L 6-BA+2.0mg/L 2，4-D两种培养基交替进行继代培养，愈伤组织能保持较好的状态和增殖速度。
6.根据权利要求1所述的柳杉茎段愈伤组织诱导及植株再生培养方法，其特征在于：步骤2)中，20d继代一次。
7.根据权利要求1所述的柳杉茎段愈伤组织诱导及植株再生培养方法，其特征在于：步骤3)中，不定芽诱导培养基为：改良DCR+2，4-D 1.0mg/L+6-BA 1.2mg/L+1.0mg/LKT+0.05mg/LNAA。
8.根据权利要求1所述的柳杉茎段愈伤组织诱导及植株再生培养方法，其特征在于：步骤4)中，28d，DCR基本培养基上成功长出新的不定芽与不定根，生根后，进行常规培养，即可植株的再生和培育成苗。
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