[发明专利]一种尘螨蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种尘螨蛋白，所述尘螨蛋白包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列和与如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少98％同源性的氨基酸序列中的至少一种，所示尘螨蛋白可以用于预防、缓解和治疗过敏性疾病，尤其是尘螨引起的过敏性疾病的药物中的应用。本发明通过基因克隆、蛋白表达和纯化，得到重组尘螨蛋白，其蛋白纯度高、产量丰富，有利于后续科研使用和大量制备应用，尤其在制备诊断、预防、治疗过敏性疾病的药物中的应用。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，特别涉及一种尘螨蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

过敏性哮喘是临床上常见病和多发病，发病率逐年上升，目前世界上有近3亿人受过敏性哮喘困扰，是目前社会面临的重大公共卫生问题。其中尘螨是最主要的过敏原，是导致呼吸道过敏性疾病的最重要因素。近20年来T细胞亚群中Th1/Th2细胞的平衡失调被认为是诱发过敏性哮喘的主要机制之一。在自然界存在众多过敏原的情况下，过敏性哮喘患者对尘螨过敏原阳性率高达70-80％，而对其它过敏原阳性率一般低于＜40％。目前，虽然对治疗过敏性哮喘有了一定的研究，但是有效的特异性手段却相对较少。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种尘螨蛋白，通过基因克隆、蛋白表达和纯化，得到重组的尘螨蛋白，所述尘螨蛋白在预防、缓解和治疗过敏性疾病，尤其涉及尘螨引起的过敏性疾病的药物中具有广泛的应用前景。

第一方面，本发明提供了一种尘螨蛋白，所述尘螨蛋白包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列和与如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少98％同源性的氨基酸序列中的至少一种。

可选的，所述尘螨蛋白为粉尘螨来源。

可选的，所述尘螨蛋白为蛋白质二硫键异构酶。

可选的，所述尘螨蛋白的编码基因包括编码如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

可选的，所述尘螨蛋白的编码基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。

可选的，所述尘螨蛋白的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQID NO:2具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQID NO:1。

在本发明中，术语“同源性”表明任何两个(或两个以上)肽、多肽或蛋白质序列具有一定程度上(“％同源”)与彼此“相同”的氨基酸序列。这种同源性程度可以使用已知的计算机程序来确定。具体的，可以但不限于NCBI数据库中的BLAST工具可被用于确定同源性。在本发明中，所述同源性至少为98％。进一步可选的，所述同源性至少为99％。

可选的，所述尘螨蛋白为非过敏原蛋白。进一步可选的，所述尘螨蛋白与过敏原相互竞争抑制过敏反应。在本发明中，所述尘螨蛋白不具有过敏原性。

第二方面，本发明提供了一种重组载体，所述重组载体包含编码如第一方面所述的尘螨蛋白的核苷酸序列。

可选的，所述重组载体包括重组表达载体和重组克隆载体中的至少一种。进一步可选的，所述重组载体中含有BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点，具体的，所述尘螨蛋白的编码基因插入至BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点之间。可选地，所述尘螨蛋白的编码基因插入到载体时，所述尘螨蛋白的编码基因的5’端可加入起始密码子(如ATG)，3’端可加入终止密码子(如TAA)。

可选的，所述重组载体中含有纯化标签，具体的可以但不限于为His标签、GST标签、SUMO标签。

可选的，所述重组载体可以但不限于为pET-32a、pGEX-6P-1、pPIC-9K、pPIC-Zα中的至少一种。

第三方面，本发明提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如第二方面所述的重组载体。