[发明专利]兔葡萄球菌病、波氏杆菌病二联组织灭活疫苗及制备方法

说明书

本发明涉及一种兔葡萄球菌病、波氏杆菌病二联组织灭活疫苗及其制备方法。所述兔葡萄球菌病、波氏杆菌病二联组织灭活疫苗，由兔葡萄球菌病组织灭活抗原液和兔波氏杆菌病组织灭活抗原液按照3:1的体积比组成。兔葡萄球菌病组织灭活抗原液由兔葡萄球菌病患兔的病变组织经匀浆、过滤、离心沉淀和灭活制备而成；兔波氏杆菌病组织灭活抗原液由兔波氏杆菌病患兔的病变组织经匀浆、过滤、离心沉淀和灭活制备而成。本发明的二联组织灭活疫苗针对性强、安全性高，能有效的预防兔葡萄球菌病和兔波氏杆菌病的发生。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种兔葡萄球菌病、波氏杆菌病二联组织灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

兔葡萄球菌病是由金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染兔引起的一种多症状传染病。临床上该病主要以脚皮炎、乳房炎、皮下脓肿、全身各种组织和器官脓肿为特征，也可见呼吸道症状。伴随呼吸道症状的死亡兔或濒临死亡兔表现为机体极度消瘦和化脓性肺炎。兔葡萄球菌病多发于温暖潮湿的季节，不同年龄和品种的兔均可发病。

兔波氏杆菌病是由支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica）感染兔引起的一种呼吸道传染病。临床上该病主要以喷嚏、咳嗽、鼻炎、支气管肺炎和脓疱性肺炎等为特征。兔波氏杆菌病在季节交替且温差大时多发，不同年龄和品种的兔均可发病。

兔葡萄球菌病和波氏杆菌病都是兔养殖过程中的常发病，给养兔业造成严重的经济损失。因此，提供一种有效的兔葡萄球菌病、波氏杆菌病二联疫苗具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种兔葡萄球菌病、波氏杆菌病二联组织灭活疫苗及其制备方法。

本发明实现上述目的，采用技术方案如下：

兔葡萄球菌病、波氏杆菌病二联组织灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：

一、兔葡萄球菌病组织灭活抗原液的制备

1. 兔葡萄球菌病病料

选取自然发病，经检测为金黄色葡萄球菌感染死亡或濒临死亡的患兔，无菌采集病变组织（气管、肺脏、肝脏、脾脏、乳房炎组织、脚皮炎组织、皮下脓肿组织、其他化脓性病变组织），以病变组织和 4℃ 预冷灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液按照质量体积比（W / V）为 1:2 混合，制成组织匀浆，现用；

2. 金黄色葡萄球菌增殖

将步骤 1 所得组织匀浆滴鼻接种健康兔使其感染金黄色葡萄球菌，接种兔于隔离器中饲养 7-30 d，待接种兔鼻腔出现黄色黏稠鼻液或机体极度消瘦时扑杀，无菌条件下取出气管、肺脏、肝脏、脾脏和淋巴结等组织器官，现用或 -20℃ 保存；

3. 兔葡萄球菌病组织抗原液制备

将步骤 2 所得组织器官剔除脂肪和结缔组织，称重，以病变组织和 4℃ 预冷灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液按照质量体积比（W / V）为 1:2 混合，制成组织匀浆；组织匀浆连续冻融 3 次后过滤，滤液于 4℃ 过夜，除去油脂，再离心除去沉淀，获得抗原液；

4. 兔葡萄球菌病组织抗原液灭活

向步骤 3 所得兔葡萄球菌病组织抗原液中加入终体积浓度为 0.4% 的甲醛，37℃ 灭活 24h，获得兔葡萄球菌病组织灭活抗原液。

二、兔波氏杆菌病组织灭活抗原液的制备

1. 兔波氏杆菌病病料