[发明专利]一种雅龙鱼染色体制备方法

权利要求书

1.一种雅龙鱼染色体制备方法，其特征在于一种雅龙鱼染色体制备方法按照以下步骤进行：

一、将体长10.20-15.17cm、重量13.20-37.56g、10月龄的雅龙鱼于水温为15℃±1℃的充气水族箱中饲养1周；

二、按照PHA与鱼体重10μg:1g的比例给雅龙鱼注射PHA，16-18h后，按秋水仙素溶液与鱼体重1-2μg:g的比例再注射秋水仙素溶液，2-4h后剪鳃断尾在水中放血，解剖鱼体，取出头肾，置于装有质量浓度为0.75％的生理盐水的平皿中清洗，清除血块后置于盛有生理盐水的培养皿中，用镊子将头肾组织磨碎，吸入10mL离心管中并用吸管反复吹打，加入生理盐水至5ml，混合均匀，以1000r/min的速度离心6min，弃掉上清液；

三、向步骤二的产物中加入4mL低渗液，吹打均匀，室温静置、低渗处理40min，加入新配制的0.5-1.0mL卡诺氏固定液，吹打均匀，再以1000r/min的速度离心6min，弃上清液，得到细胞沉淀；

四、在细胞沉淀中加入0.5-1.0mL卡诺氏固定液，吹打均匀，再加入2-3mL卡诺氏固定液，室温静置固定15min后，再以1000r/min的速度离心6min，弃掉上清液；

五、重复步骤四2次，弃掉上清液；

六、将步骤五离心后的细胞沉淀加入卡诺氏固定液1-1.2ml，混合均匀制成细胞悬液，将细胞悬液吸入胶头滴管内，在胶头滴管距离冷冻玻片25-30cm、胶头滴管与冷冻玻片夹角为35-50度的条件下滴加2-3滴细胞悬液，然后将冷冻玻片在酒精灯火焰上方过3-5次，均匀烘烤，室温下自然干燥，即得雅龙鱼染色体。

2.根据权利要求1所述一种雅龙鱼染色体制备方法，其特征在于步骤二中按照PHA与鱼体重10μg:1g的比例给雅龙鱼注射PHA，17h后，按秋水仙素溶液与鱼体重1μg:g的比例再注射秋水仙素溶液。

3.根据权利要求1所述一种雅龙鱼染色体制备方法，其特征在于步骤二中3h后剪鳃断尾在水中放血，解剖鱼体，取出头肾，置于装有质量浓度为0.75％的生理盐水的平皿中清洗，清除血块后置于盛有生理盐水的培养皿中，用镊子将头肾组织磨碎，得到细胞悬浮液。

4.根据权利要求1所述一种雅龙鱼染色体制备方法，其特征在于步骤三中加入0.8mL卡诺氏固定液。

5.根据权利要求1所述一种雅龙鱼染色体制备方法，其特征在于步骤三中所述的低渗液为质量浓度为0.5％的氯化钾溶液。

6.根据权利要求1所述一种雅龙鱼染色体制备方法，其特征在于步骤三中所述的卡诺氏固定液由甲醇与冰醋酸按照3：1的体积比制成。

7.根据权利要求1所述一种雅龙鱼染色体制备方法，其特征在于步骤六中所述的卡诺氏固定液由甲醇与冰醋酸按照3：1的体积比制成。

8.根据权利要求1所述一种雅龙鱼染色体制备方法，其特征在于步骤六中所述的冷冻玻片预先用70％酒精浸泡后擦干净，再冷冻。

9.根据权利要求1所述一种雅龙鱼染色体制备方法，其特征在于步骤六中胶头滴管与冷冻玻片夹角为45度。

10.根据权利要求1所述一种雅龙鱼染色体制备方法，其特征在于步骤六中然后将冷冻玻片在酒精灯火焰上方过3-5次，均匀烘烤，室温下自然干燥。