[发明专利]与弱筋小麦宁麦9号低蛋白相关的特异性引物及其应用

说明书

本发明提供了一种与弱筋小麦宁麦9号低蛋白相关的引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2及其在鉴定或辅助鉴定长江中下游冬麦区弱筋小麦籽粒蛋白含量中的应用，包括以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2分别作为上下游引物，以小麦基因组为模板进行PCR扩增反应，扩增产物经限制性内切酶BtsI酶切后再进行琼脂糖电泳检测，电泳产物出现两个条带的小麦样本籽粒蛋白含量显著低于电泳产物出现一个条带的小麦样本籽粒蛋白含量；该检测方式更为简便、准确，检测效率更高。

技术领域

本申请涉及小麦育种领域，特别是一种与弱筋小麦品种宁麦9号低蛋白SNP 位点相关的特异性引物及其应用。

背景技术

蛋白质是小麦籽粒的重要组分,不仅影响小麦的营养品质,同时也是小麦加工品质的基础。蛋白质含量为典型的数量性状,其遗传受多基因控制,且易受环境影响。采用传统育种手段进行蛋白质含量选择存在工作量大(籽粒收获后测定)、选择效率低(环境影响)等问题，而分子标记辅助选择育种可在DNA水平针对目标性状进行选择，不仅结果稳定，而且可以在苗期进行选择，降低表型评价的成本，提高小麦育种效率。

目前关于蛋白质含量分子标记和QTL定位的已有诸多报道，分布于多条染色体。吴云鹏等利用”PH82-2/内乡188”RIL群体，在3A和3B染色体上检测到控制籽粒蛋白质含量的QTL；沈玮囡等在1B、2B等5条染色体上定位到控制籽粒蛋白质含量的QTL，遗传贡献率最高近30％；Bordes等利用372份来自世界各地的小麦材料及803个分子标记在15条染色体上关联到14个籽粒蛋白质含量相关的分子标记；Jochen等以207份欧洲冬小麦品系为材料，利用115个分子标记在4条染色体上关联到4个籽粒蛋白质含量相关的分子标记。不同研究者可能采用不同的作图群体与方法，获得的结果具有一定的局限性，特别是受环境影响较高的性状，因此从某一地域的品种材料中发掘优势等位变异，进而开发分子标记，对当地品种选择更具有实际意义。

单核苷酸多态性(SNP)标记迅速具有遗传稳定、数量多、分布广且易于检测等特点，适合于数量庞大的检测分析，目前市场中已存在多种适用于不同动植物的SNP芯片，在遗传研究中发挥着越来越重要的作用。而通过遗传分析找到重要性状的标记位点后，需要将其转化为易用的分子标记，基于PCR及酶切技术的 CAPs(Cleaved AmplifiedPolymorphism Sequences)标记是解决方案之一，可以将SNP标记不同等位变异区分。

蛋白质含量(11.5％)是弱筋小麦的重要评价指标。长江中下游麦区是我国弱筋小麦生产的优势产业带，在多年的育种实践中积累了一批以宁麦9号为代表的优质弱筋品种及品系，其中含有大量优势等位变异，但缺乏相关分子标记及其特异性检测引物。

关联分析是以连锁不平衡为基础，鉴定某一群体内目标性状与遗传标记或候选基因关系的分析方法。近年来,该技术已在小麦产量、品质、抗病性等遗传学研究上广泛采用。目前与弱筋小麦品种宁麦9号低蛋白SNP位点相关的引物研究尚未见报道。

发明内容

针对上述问题，本发明以包含宁麦9号在内的长江中下游冬麦区101份小麦品种为材料，利用高通量基因芯片获取基因型数据，通过关联分析检测到1个位于小麦2D染色体端部并与蛋白质含量相关的位点，并将其转化为CAPs标记，获得一对特异性引物，经验证该引物可初步区分弱筋小麦(国家标准规定弱筋小麦籽粒蛋白含量不高于11.5％)中高低蛋白含量，为长江中下游麦区小麦品质育种提供帮助。

为实现上述发明目的，本神奇首先一种与弱筋小麦宁麦9号低蛋白相关的特异性引物，所述引物由上游引物GPC-F和下游引物GPC-R组成，所述上游引物 GPC-F核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物GPC-R核苷酸序列如SEQ ID NO.2 所示。