[发明专利]中国黄牛PLAG1基因19-bp重复缺失多态性的检测方法及其应用在审

申请号：	201810605251.0	申请日：	2018-06-13
公开（公告）号：	CN108866202A	公开（公告）日：	2018-11-23
发明（设计）人：	王淑辉;孙秀柱;李泽;樊路杰;王国艳;江钧益	申请（专利权）人：	西北农林科技大学
主分类号：	C12Q1/6888	分类号：	C12Q1/6888;C12N15/11
代理公司：	西安恒泰知识产权代理事务所 61216	代理人：	李郑建
地址：	712100 陕***	国省代码：	陕西;61
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摘要：
搜索关键词：	缺失多态性黄牛基因生长性状重复肉牛标记辅助选择育种黄牛全基因组DNA 琼脂糖凝胶电泳胸围应用不同基因电泳结果快速建立生长性能遗传资源基因型检测体长体高位点胸宽引物群体
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【权利要求书】：

1.一种中国黄牛PLAG1基因19-bp重复缺失多态性的检测方法，其特征在于，该方法以中国黄牛全基因组DNA为模板，用引物对P1通过PCR扩增中国黄牛PLAG1基因部分片段；再对PCR扩增得到的片段进行琼脂糖凝胶电泳；根据电泳结果鉴定中国黄牛PLAG1基因上的插入/缺失多态性位点的基因型；

所述的引物对P1为：

上游引物：5’-GATCCCACCTGACAAACG-3'；

下游引物：5'-CTAGAGCTGCCTCGCACA-3'。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述中国黄牛PLAG1基因上的插入/缺失多态性位点是指中国黄牛PLAG1基因AC_000171.1g.3747444-3747462位点上存在的19-bp重复缺失多态性片段GAACACACAGCCCACAAGG。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序为：95.0℃预变性5min；95.0℃变性30s，68℃退火30s，72℃延伸20s，2个循环；之后每2个循环降退火温2-3℃；94.0℃变性30s，53℃退火30s，72.0℃延伸20s，30个循环；最后72.0℃延伸10min，4℃条件下存扩增产物。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶电泳采用质量浓度为2.0-3.0％的琼脂糖凝胶。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述电泳结果鉴定中国黄牛PLAG1基因上的插入/缺失多态性位点的基因型分别为：

插入/插入(II)基因型，表现为262bp一条带纹；

插入/缺失(ID)基因型，表现为262bp和243bp两条带纹；

缺失/缺失(DD)基因型，表现为243bp一条带纹。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述插入/缺失多态性位点的缺失/缺失(ID)基因型作为中国黄牛繁殖性状的分子标记。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述中国黄牛选自秦川牛，南阳牛，鲁西牛或郏县牛。

8.一种中国黄牛PLAG1基因19-bp重复缺失多态性的检测试剂盒，其特征在于，包括用于PCR扩增中国黄牛PLAG1基因上19-bp重复缺失多态性位点的引物对P1，所述的引物对P1为：

上游引物：5'-GATCCCACCTGACAAACG-3'；

下游引物：5'-CTAGAGCTGCCTCGCACA-3'。

9.权利要求1所述的中国黄牛PLAG1基因19-bp重复缺失多态性的检测方法用于中国黄牛分子标记辅助选择育种中的应用。

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