[发明专利]一种新型提纯汞螯合型免疫复合物方法

权利要求书

1.一种新型提纯汞螯合型免疫复合物方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：先将螯合剂溶液配制完成，再将螯合剂溶于溶剂中，即可得到螯合剂溶液；

步骤二：取适量载体蛋白，将载体蛋白加入到硼酸盐缓冲溶液中，即可制得载体蛋白溶液；

步骤三：将已制得的螯合剂溶液加入到载体蛋白溶液中，置于恒温水浴中并搅拌均匀，恒温水浴，即可得到混合液；

步骤四：自制半透膜，向光滑、洁净、干燥的250ml锥形瓶中倒入火棉胶溶液，小心转动容器，使火棉胶溶液均匀附在壁上成一薄层，倾出多余的溶液，然后将容器倒置，进一步将多余溶液流尽和使溶剂乙醚挥发掉，直至用手指轻触所形成的膜而不粘着方可，然后往容器中加水至满为止，遇水后在乙醚未蒸发干的地方会发白，制成半透膜，将瓶口上的膜脱开，并在膜与容器壁间注入水，使膜自动脱离瓶壁，轻轻取出制成的袋形半透膜，检查是否有孔洞，如果有则不能使用，应重新制作，若以膜袋浸入不同浓度的乙醇水溶液中，则可得到不同渗透度的膜，按此法制作的半透膜不使用时，则应存放于水中，以免损坏；

步骤五：预提纯除去未螯合的汞离子和其它杂离子，在将3-5组半透膜按内外次序排列后加入EDTA溶液煮沸10min，弃废液后用ddH₂O冲洗，重复该步骤2-4次，步骤三中的混合液装入处理后的多层半透膜中，用ddH₂O透析换水，4℃透析过夜之后，收集液体；

步骤六：除去未结合的载体蛋白，取未使用的复式层析柱，用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在上层层析柱中装入能与汞离子特异性结合的填料，在下层层析柱中装入能与载体蛋白特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液K₂HPO₄平衡层析柱，待层析柱平衡后，用稀释缓冲液K₂HPO₄稀释步骤四中的样品，然后上柱，载体蛋白与填料特异性结合，使用稀释缓冲液K₂HPO₄冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.07-0.1mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱，收集得到的洗脱液，装入半透膜，用ddH₂O透析，换水2-4次后，4℃透析过夜，收集样本，即可得到高纯度的汞螯合型免疫复合物。

2.根据权利要求1所述的汞螯合型免疫复合物，其特征在于:所述免疫复合物或载体蛋白的结构中至少含有锌指结构、巯基、半胱氨酸残基中的一种，汞离子与免疫复合物或载体蛋白与锌指结构或巯基或半胱氨酸残基相结合。

3.根据权利要求1所述的汞螯合型免疫复合物，其特征在于:所述载体蛋白为抗体蛋白、脂蛋白、血红蛋白、核抗原、异种血清抗原、病毒、细菌、原虫、蠕虫或免疫球蛋白之中的一种。

4.根据权利要求1所述的汞螯合型免疫复合物，其特征在于，所述汞离子通过螯合剂与载体蛋白结合后再与能和载体蛋白特异性结合的抗体结合，所述螯合剂为ITCBE、EDTA、多磷酸盐、氨基羧酸、1,3-二酮、羟基羧酸中的一种。

5.一种定性检测汞螯合型循环免疫复合物的方法，其特征在于，以已知含量的权利要求1所述的汞螯合型免疫复合物作为标准品，采用以下方法之一对样品进行检测：酶联免疫法、酶联免疫与原子吸收光谱结合法、酶联免疫与电感耦合等离子体质谱结合法、提纯免疫复合物与原子吸收光谱结合法、提纯免疫复合物与电感耦合等离子体质谱结合法、电泳与酶联免疫或原子吸收光谱或电感耦合等离子体质谱结合法。