[发明专利]一种未使用缓冲液电转化感受态细胞的制备方法

权利要求书

1.一种未使用缓冲液电转化感受态细胞的制备方法，包括以下步骤：

1)将大肠杆菌接种于含有镁离子的LB液体培养基中进行第一培养，得到第一培养物；

2)将所述步骤1)得到的第一培养物与LB液体培养基混合，至OD₆₀₀值为0.08～0.10时进行第二培养，至OD₆₀₀值为0.35～0.40时，得到第二培养物；

3)将所述步骤2)得到的第二培养物进行第一离心分离，弃去上清液后得到第一沉淀；所述第一离心分离的时间为15～25min；

4)将所述步骤3)得到的第一沉淀与水混合，待所述第一沉淀悬起后进行第二离心分离，弃去上清液后得到第二沉淀；所述第二离心分离的时间为10～20min；

5)将所述步骤4)得到的第二沉淀与水混合，待所述第二沉淀悬起后进行第三离心分离，弃去上清液后得到第三沉淀；所述第三离心分离的时间为5～15min；

6)重复步骤5)1次，得到第四沉淀；

7)将所述步骤6)得到的第四沉淀与水混合，待所述第四沉淀悬起后进行第五离心分离，弃去上清液后得到第五沉淀；所述第五离心分离的时间为5～15min；

8)将所述步骤7)得到的第五沉淀与水混合，待所述第五沉淀悬起后，与二甲基亚砜混匀，得到电转化感受态细胞。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)LB液体培养基中镁离子的浓度为0.005～0.015M。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤8)将第五沉淀悬起所需水与二甲基亚砜的体积比为(1129～1222):(85～92)。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)第一培养的条件包括：所述第一培养的温度为30～42℃，所述第一培养的转速为200～280rpm，所述第一培养的时间为10～14h。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)第二培养的条件包括：所述的第二培养温度为15～25℃，所述第二培养的转速为200～280rpm，所述第二培养的时间为5～7h。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)第二培养物进行第一离心分离的前处理条件包括：将所述第二培养物在0～4℃中冷却5～10min。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤4)第一沉淀的质量与水的体积比为(1～3)g:(180～220)ml。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤5)第二沉淀的质量与水的体积比为(0.5～2)g:(80～120)ml；

所述第三离心分离的条件包括：所述第三离心分离的温度为0～4℃，所述第三离心分离的转速为3500～4500rpm。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤7)第四沉淀的质量与水的体积比为(0.5～1.5)g:(20～30)ml；

第四离心分离的条件包括：所述第四离心分离的温度为0～4℃，所述第四离心分离的转速为3500～4500rpm。

10.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤8)第五沉淀的质量与水的体积比为(0.3～1):(1180～1200)μl。