[发明专利]一种IFNβ和FerritinH基因联合修饰的骨髓间充质干细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种IFNβ和FerritinH基因联合修饰的骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.构建FerritinH-T2A-IFNβ过表达慢病毒载体，所述FerritinH-T2A-IFNβ的序列如SEQ ID NO:3所示；

S2.采用S1所得FerritinH-T2A-IFNβ过表达慢病毒载体转染骨髓间充质干细胞。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S1所述构建FerritinH-T2A-IFNβ过表达慢病毒载体的具体步骤为：获取大鼠FerritinH与IFNβ序列，设计特异性引物对，PCR扩增FerritinH-T2A-IFNβ；将PCR产物连接入GV367转移载体，构建重组质粒，采用阳性克隆基因测序及目的基因表达检测验证；用重组质粒、包装质粒及包膜质粒共转染293T细胞，制备慢病毒颗粒，即得FerritinH-T2A-IFNβ过表达慢病毒载体。

3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:2所示。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S2所述转染的具体步骤为：采用感染复数为10，转染时间为10h转染骨髓间充质干细胞，经2μg/mL嘌呤霉素筛选7d后再采用含1μg/mL嘌呤霉素的完全培养基连续培养，即得稳定表达抗性基因的FerritinH-T2A-IFNβ-MSCs。

5.权利要求1～4任一所述方法制备得到的骨髓间充质干细胞，其特征在于，所述骨髓间充质干细胞由IFNβ和FerritinH基因联合修饰，能同时表达分泌蛋白IFNβ和胞质蛋白FerritinH。

6.权利要求5所述的骨髓间充质干细胞在制备治疗胶质瘤的制剂或药物中的应用。

7.权利要求5所述的骨髓间充质干细胞在制备胶质瘤细胞生长抑制剂中的应用。

8.根据权利要求6或7任一所述的应用，其特征在于，所述的胶质瘤为颅内原位胶质瘤。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的胶质瘤为C6胶质瘤细胞。