[发明专利]一种L-半胱氨酸自供能生物传感器的制备方法

权利要求书

1.一种L-半胱氨酸自供能生物传感器的制备方法，其特征在于：基于超薄多孔碳壳/金纳米颗粒复合物UPCS/AuNPs和碳布构建自供能生物传感器的阴极和阳极；

所述阳极的组装步骤如下：步骤1.将30~50 μL UPCS/AuNPs滴涂在碳布电极表面1×1cm²，37 ℃干燥2~4 h后，将其浸在5~10 mg/mL EDC/NHS溶液中0.5~1 h，超纯水冲洗后涂滴上50~100 μL 1~5 mM DNA1，室温下放置12 h，加入20~50 μL浓度为1、5 mM的六巯基己醇MCH反应0.5~1 h，离心去除过量的MCH；步骤2. 当0.2 μM~20 μM Ag⁺存在时，将20~50 μLDNA2-GOD共轭体N-GR/AuNPs溶液滴涂于步骤1制得的电极表面，在37 ℃反应1~2 h，适配体中的C-C碱基选择性捕获Ag⁺，将修饰葡萄糖氧化酶的共轭体固定在电极表面，制得生物阳极；

所述的阴极的组装步骤如下：取30~50 μL UPCS/AuNPs滴涂在碳布电极表面，在37 ℃干燥2~4 h，将电极浸在3~6 mM pH 8.5的多巴胺溶液中，反应2~4 h，用超纯水冲洗；滴涂上20~50 μL 30~50 mg/mL的漆酶孵育12~24 h，用超纯水洗涤后，在4 ℃条件下保存；

所述DNA2-GOD共轭体N-GR/AuNPs溶液的制备方法，包括以下步骤：

步骤1. DNA2-GOD的制备：将50~100 μL 1~5 mM DNA2与2~5 mL 5~10 mg/mL的EDC/NHS溶液在室温下混合1~2 h，用磷酸盐缓冲溶液PBS纯化8~10次；将400~600 μL 5~10 mg/mLGOD与1~2 mg 4-（N-马来酰亚胺甲基）环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐sulfo-SMCC混合1~2 h，纯化去除多余的sulfo-SMCC；将活化的GOD与DNA2混合24~48 h，用PBS纯化8~10次除去未结合的DNA2；

步骤2. 5~10 mL N-GR/AuNPs与2~5 mL 5~10 mg/mL的EDC/NHS溶液混合，然后加入300~500 μL步骤1中制得的DNA2-GOD，在4 ℃条件下放置12~24 h；随后，加入20~50 μL浓度为1.5 mM的六巯基己醇MCH反应0.5~1 h，阻断非特异性结合位点，离心去除过量的MCH，沉淀物重新分散在pH 7.4的PBS溶液中，得到DNA2-GOD共轭体N-GR/AuNPs；

DNA1适配体序列：5’-NH₂-C₆-CTC TCT CTC TCT CTC TCT CTC-3’

DNA2适配体序列：5’-NH₂-C₆-CAC ACA CAC ACA CAC ACA CAC-3’

其中，利用AuNPs与PDDA修饰的UPCS制备所述UPCS/AuNPs；

其中，利用AuNPs与PDDA修饰的N-GR制备所述N-GR/AuNPs。

2.如权利要求1所述的L-半胱氨酸自供能生物传感器的制备方法制得的传感器的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

在不引入目标L-半胱氨酸L-Cys时，测量传感器的开路电压E^OCV；引入目标L-Cys时，不同浓度的L-Cys与生物阳极在37 ℃下孵育10~60 min后，测量传感器的开路电压E^OCV；所述传感器的支持电解液为含5 mM葡萄糖pH 7.4的0.1 M PBS缓冲体系。