[发明专利]哈维氏弧菌（VHV）的RAA恒温荧光检测方法及试剂

权利要求书

1.一种哈维氏弧菌（VHV）核酸的检测试剂盒，包括：哈维氏弧菌正向引物、反向引物以及特异性荧光探针，其中所述哈维氏弧菌正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示、所述哈维氏弧菌反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3，其5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的核酸检测试剂盒，所述特异性荧光探针的荧光报告基团选自FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas Red或LC RED460中的一种，荧光淬灭基因选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1或Tamra中的一种。

3.根据权利要求1和2所述的核酸检测试剂盒，还包括引物混合液、特异性荧光探针、ABuffer、B Buffer、RAA干粉试剂、哈维氏弧菌标准品和ddH₂O中至少一种。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中，所述A Buffer为20% PEG ；B Buffer为280mMMgAc。

5.根据权利要求5所述的试剂盒，其中，所述的RAA干粉试剂的成分如下：1mmol/LdNTP、90ng/μL SSB蛋白、120ng/μL recA重组酶蛋白（SC-recA/BS-recA）或30ng/μL Rad51、30ng/μL Bsu DNA聚合酶，100mmol/L Tricine、20% PEG、5mmol/L 二硫苏糖醇、100ng/μL肌酸激酶、Exo核酸外切酶。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的核酸检测试剂盒，哈维氏弧菌标准品为含有哈维氏弧菌保守区溶血素vhhA基因部分序列的阳性质粒。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，所述含有哈维氏弧菌保守区溶血素vhhA基因部分序列的阳性质粒的序列如SEQ ID NO.4所示。

8.哈维氏弧菌的RAA恒温荧光检测方法，提取待测样品的DNA，以待测样品的DNA 为模板，在哈维氏弧菌的正向引物、反向引物、特异性荧光探针及RAA干粉试剂、A Buffer、BBuffer和ddH₂O存在下进行实时荧光RAA反应，根据实时荧光RAA扩增曲线分析待测样品；其中所述哈维氏弧菌正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1 所示、所述哈维氏弧菌反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2 所示，所述特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3，其5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。