[发明专利]一种卵裂培养液及其制备方法

权利要求书

1.一种卵裂培养液，其特征在于：是将丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、硫辛酸、透明质酸和螯合剂溶解于含有抗菌素和指示剂的盐溶液中配制而成。

2.根据权利要求1所述的卵裂培养液，其特征在于：所述盐溶液中，丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸的浓度均为0.02-1.50mmol/L；透明质酸的浓度为0.01-0.50mg/mL、硫辛酸的浓度为0.01-0.30mmol/L；螯合剂适量。

3.根据权利要求2所述的卵裂培养液，其特征在于：所述的螯合剂为四元羧酸乙二胺四乙酸。

4.根据权利要求3所述的卵裂培养液，其特征在于：所述抗菌素为庆大霉素，浓度为4-12μg/mL。

5.根据权利要求4所述的卵裂培养液，其特征在于：所述指示剂为酚红，浓度4.5-10.0μg/mL。

6.根据权利要求5所述的卵裂培养液，其特征在于：所述盐溶液是以碳酸氢钠为缓冲剂，以钠、钾、镁、钙离子为基础，并以葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、白蛋白为能量物质的化合物溶液；其中包含：氯化钠89.00-108.00mmol/L、氯化钾4.00-6.00mmol/L、硫酸镁0.10-1.20mmol/L、磷酸二氢钾0.3-0.6mmol/L、磷酸二氢钠0.10-0.50mmol/L、氯化钙1.60-2.50mmol/L、碳酸氢钠18.00-26.00mmol/L、葡萄糖0.30-0.80mmol/L、丙酮酸钠0.20-0.60mmol/L、乳酸钠9.00-23.00mmol/L、磷酸二氢钾0.20-0.50mmol/L；

所述白蛋白为重组人血清白蛋白，是采用医疗级的重组人血清白蛋白干粉溶解于盐水溶液中制备而成，终浓度为0.0-6.0mg/mL。

7.如权利要求6所述卵裂培养液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)配制盐溶液：先按照盐溶液的各组分用量称量好各种组分，备用；再将除了抗菌素、指示剂、碳酸氢钠以外的各组分溶于超纯注射级用水中，溶解过程中遵循先固体后液体的原则；所述超纯注射级用水经0.1-0.2μM滤膜过滤，内毒素＜0.015EU/mL；然后，依次加入称量好的抗菌素、指示剂、碳酸氢钠，制得盐溶液；

(2)检测步骤(1)所得盐溶液的渗透压和pH值，并记录最终渗透压和pH值；所述渗透压保持为260-285mOsm/Kg，所述pH值保持为7.30-7.80；

(3)按照预配制的容量，将重组人血清白蛋白按终浓度为0.0-6.0mg/mL补充到盐溶液中；

(4)将丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸分别以0.02-1.50mmol/L的浓度溶解于盐溶液中；将透明质酸按照0.01-0.50mg/mL的浓度溶解于盐溶液中；将硫辛酸以0.01-0.30mmol/L的浓度溶解于盐溶液中；将适量螯合剂溶解于盐溶液中；到充分溶解止；

(5)将步骤(4)所得溶液经过0.2μm滤膜过滤灭菌后，取样测试；测试参数：

A、20-30℃条件下pH值：7.30-7.80；

B、渗透压：260-285mOsm/Kg；

C、内毒素：＜0.15EU/mL；

D、一细胞鼠胚培养到96小时：≥80％的囊胚形成率；

(6)将配制好的溶液在百级GMP车间进行无菌分装和标签。