[发明专利]公主岭霉素抑菌活性检测方法及应用

说明书

本发明提供了一种公主岭霉素抑菌活性检测方法及应用，涉及抑菌活性检测方法技术领域，所述方法包括如下步骤：提供公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液，然后将不同体积比的公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液混合，得到公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液的临界抑菌体积比，根据该临界抑菌体积比，确定公主岭霉素水提液对供试菌的抑菌活性，缓解了现有的抑菌活性检测方法中物理化学检测方法要求高，微生物法不易操作的技术问题，本发明提供的方法直观性好、灵敏度高、稳定性好、简单方便，耗时短，适用范围广，更安全，更可靠，费用更低，为公主岭霉素抑菌活性检测提供了一种新途径。

技术领域

本发明涉及抑菌活性检测方法技术领域，尤其是涉及一种公主岭霉素抑菌活性检测方法及应用。

背景技术

农抗769是由吉林省农科院专家1967年从公主岭土壤中分离筛选得到的一株农用链霉菌菌株，公主岭霉素是农抗769的代谢产物，是一种自然生物合成的混合制剂。

目前，评定公主岭霉素质量的一个重要指标为抑菌活性，其测定方法有物理化学法和微生物法。物理化学法虽然简便、快速，但是对公主岭霉素纯度要求很高，否则会造成很大偏差，且测定仪器昂贵，检测费用高昂。微生物法包括稀释法、比浊法、管蝶法、呼吸度量法和脱氢法，这些方法灵敏度高，安全可靠，得到了广泛应用，但是这些微生物检测法操作步骤多，试验过程长，影响因素较多，不易于检测人员掌握。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种公主岭霉素抑菌活性检测方法，以缓解现有的物理化学检测方法要求高，微生物法不易操作等技术问题。

本发明提供的公主岭霉素抑菌活性检测方法，包括如下步骤：

(a)提供公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液；

(b)将不同体积比的公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液混合，分别调查供试菌的生长情况，得到公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液的临界抑菌体积比，根据公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液的临界抑菌体积比，确定公主岭霉素水提液对供试菌的抑菌活性。

进一步的，在步骤(b)中，将不同体积比的公主岭霉素水提液和供试菌菌悬液混合，培养2-6天后，再分别调查供试菌的生长情况。

进一步的，所述供试菌为真菌；

优选地，所述供试菌选自玉米大斑病菌、烟草赤星病菌或球孢白僵菌中的一种。

进一步的，在步骤(b)中，供试菌菌悬液的OD值为0.3-0.35。

进一步的，所述公主岭霉素水提液按照如下步骤制备而成：

(m)将农抗“769”菌种接种到培养基质中，完全培养，得到公主岭霉素和培养基质的混合物；

(n)将公主岭霉素和培养基质的混合物进行干燥，得到公主岭霉素固体物，将公主岭霉素固体物粉碎，用水浸提，得到公主岭霉素浸提液；

(s)将公主岭霉素浸提液离心，取上清液，即得到公主岭霉素水提液。

进一步的，在步骤(m)中，培养时间为5-7天，优选为6天。

进一步的，在步骤(n)中，浸提时间为24-48h，优选为36h。

进一步的，在步骤(n)中，公主岭霉素固体物粉碎后的粉碎物与水的体积比为1:2-10，优选为1:2。

进一步的，在步骤(m)中，所述培养基质为玉米碴；

优选地，所述玉米碴经过浸泡、沥干和灭菌处理；

优选地，用水对玉米碴进行浸泡，玉米碴浸泡时间为1.5-8h，优选为3h；