[发明专利]一种细菌多糖结合疫苗及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种细菌多糖结合疫苗及其制备方法与应用，所述细菌多糖结合疫苗包括以共价键结合的乙肝核心抗原与细菌多糖；本发明提供的细菌多糖结合疫苗可将细菌多糖非T细胞依赖性抗原转换为T细胞依赖性抗原，产生Th1型细胞免疫，相比于普通现有的多糖疫苗，显著增强特异性抗体滴度、亲和力(硫氰酸盐测定出的亲和力指数可达到2mol/L左右，最高可达到2.17mol/L)以及持效性，且具有突出的稳定性，在37℃下储存21天，游离多糖含量未见显著增加，易于放大生产，具有较高的实际应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种细菌多糖结合疫苗及其制备方法与应用。

背景技术

脑膜炎球菌是世界范围内侵袭脑膜炎的主要致病菌。脑膜炎奈瑟球菌通过鼻咽部入侵人体，在脑脊髓膜形成化脓性脑脊髓膜病变，是细菌性脑膜炎最常见的致病菌，同时也是唯一能引起流脑大规模流行的细菌。当脑膜炎奈瑟球菌进入血液循环后，流脑通常会在1-3天内迅速发病，是一种有较高发病率和死亡率的疾病。即便在感染后给予抗生素治疗，10％的病人也会死于症状发作的24-48小时；另外10％-20％的治愈者会有永久性后遗症比如神经错乱或者神经性耳聋等，对机体产生严重危害，对社会和家庭造成沉重的负担。

脑膜炎球菌有13种血清型，其中六种(A、B、C、W135、X和Y)为主要致病群，可以导致疾病传播。注射疫苗是脑膜炎球菌感染的最主要预防手段。细菌荚膜多糖是脑膜炎球菌主要的毒力因子，也是保护性疫苗的基础成分。目前上市的脑膜炎疫苗主要分为两种，多糖疫苗和多糖结合疫苗。多糖疫苗以脑膜炎荚膜多糖为主要成分，能在成人中诱导产生抗体，但对小于两周岁的婴幼儿不能诱导保护性抗体，也不能产生免疫记忆。多糖结合疫苗是多糖与载体蛋白共价结合，可将T细胞非依赖性抗原转换为T细胞依赖性抗原，能对包括婴幼儿在内的所有年龄段人群产生抗体保护，从而扩大了疫苗的使用人群。

目前，多糖结合疫苗的研究正呈快速发展趋势，但是可供选择的载体蛋白仍然十分有限，上市的载体蛋白包括破伤风类毒素(TT)，白喉类毒素(DT)，非毒性白喉突变体(CRM197)，B群流脑外膜蛋白复合物(OMP)和嗜血杆菌蛋白D，随着多糖结合疫苗种类的增多，载体的单一或者重复接种可能会产生载体诱导的表位抑制效应(CIES)、载体启动效应或者旁观者效应等，导致免疫干扰越来越多。

CN104001166B公开了一种ABC群脑膜炎球菌联合疫苗及其制备方法，其由A、C群脑膜炎球菌荚膜多糖分别与B群血清型4型(CMCC29356)脑膜炎球菌外膜蛋白囊(OMV)共价结合的多糖蛋白偶联物，以及B群ST 4821基因型(xrsw341215)脑膜炎球菌外膜蛋白囊(OMV)组成。这种结合疫苗的载体较为单一，产生的免疫干扰较多。

CN106075430A公开了一种多价肺炎球菌ACYW135脑膜炎球菌联合疫苗，其中每剂量含肺炎球菌荚膜糖50～500μg/mL，A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜糖50～500μg/mL和载体蛋白，载体蛋白用于与荚膜糖共价结合。肺炎球菌的血清型为以下血清型中的一种或多种：1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F或23F。疫苗的载体为肺炎球菌表面蛋白A。这种联合疫苗使用乙肝表面抗原，对于B细胞的激活能力较差，并且载体稳定性较低，亲和力较差。

CN105879020A公开了一种新式的C群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗的制备方法。将纯化的C群脑膜炎球菌荚膜多糖使用EDAC催化其与连接臂ADH共价结合，制备多糖衍生物，随后将多糖衍生物与载体蛋白白喉毒素无毒突变体CRM197在EDAC催化下共价结合，形成多糖蛋白结合物；经纯化、过滤后得到C群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗原液。这种疫苗的载体使用了白喉毒素，具有局限性，可能会产生免疫干扰作用。

目前结合疫苗的载体具有一定的局限性，因此研究新型、安全有效的疫苗载体对多糖结合疫苗的发展十分有必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种细菌多糖结合疫苗及其制备方法与应用。